豬流行性腹瀉病毒（PEDV）膜蛋白互作宿主細(xì)胞蛋白的篩選
發(fā)布時間：2021-06-08 19:53
豬流行性腹瀉（Porcine epidemic diarrhea,PED）是由豬流行性腹瀉病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）引起的豬的一種高度接觸性腸道傳染病,以嘔吐、腹瀉和食欲下降為病癥基本特征,各個年齡豬均易感,帶給養(yǎng)豬業(yè)巨大的損失。PEDV編碼結(jié)構(gòu)蛋白S、E、M、N和16個非結(jié)構(gòu)蛋白。M蛋白是PEDV病毒囊膜蛋白中含量最多的蛋白,參與病毒的組裝,并在病毒逃避宿主天然免疫方面發(fā)揮重要的作用,但是,目前的研究并不清楚與M蛋白直接作用的宿主蛋白,以及M蛋白是否還具有其他生物特性。因此,這些宿主蛋白的篩選有助于解析病毒的致病機(jī)理,并對找出影響病毒復(fù)制、裝配及與宿主相互作用的靶點,對發(fā)展新型的抗病毒藥物和疫苗都具有很重要的影響。本研究的研究內(nèi)容及結(jié)果如下:（1）與PEDV M互作的宿主蛋白的篩選方法一:重組質(zhì)粒瞬時轉(zhuǎn)染篩選豬小腸上皮（IPEC-J2）細(xì)胞內(nèi)與PEDV M蛋白互作的蛋白。構(gòu)建帶有M-APEX2、APEX2基因的重組質(zhì)粒,并轉(zhuǎn)染至IPEC-J2細(xì)胞,通過底物催化抗壞血酸過氧化物酶（APEX2）標(biāo)記互作蛋白;構(gòu)建帶有M-HA基因的重組...
【文章來源】：上海海洋大學(xué)上海市
【文章頁數(shù)】：63 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
PEDV基因組結(jié)構(gòu)示意圖
圖 1-2 PEDV 基因組復(fù)制[[45]Figure 1-2 The replication of PEDV[45]1.2 冠狀病毒 M 蛋白的研究進(jìn)展冠狀病毒感染細(xì)胞后，病毒蛋白不僅通過阻斷一條或多條蛋白的干擾素和NF-κB 信號通路增強(qiáng)病毒的復(fù)制[46,47]，而且通過不同的路徑和靶點拮抗先天性免疫應(yīng)答[46]，導(dǎo)致細(xì)胞轉(zhuǎn)錄模式、細(xì)胞循環(huán)周期、凋亡途徑等發(fā)生改變[48]。M 蛋白是冠狀病毒的主要結(jié)構(gòu)蛋白之一，屬于膜糖蛋白，具有高度保守的糖基化序列，它在病毒和宿主細(xì)胞之間的互作過程中發(fā)揮重要作用[49]。M 蛋白含有三個跨膜結(jié)構(gòu)域，從 N 端開始依次為 TM1、TM2 和 TM3，主要聚集在高爾基體復(fù)合物，通過與 S 蛋白和 N 蛋白的相互作用參與病毒的組裝[50]，負(fù)責(zé)將病毒 RNA 包裝成成熟的病毒粒子。在病毒裝配期間將核衣殼連接到囊膜上，決定病毒粒子的裝配位點、病毒成熟及出芽位點[51]。病毒感染、復(fù)制期間，宿主的先天性免疫應(yīng)答是抗病毒的第一道屏障，在冠狀病毒蛋白拮抗宿主的先天性免疫應(yīng)答研究中，M 蛋白是近幾年研究的熱點之一。SARS-CoV 結(jié)構(gòu)蛋白調(diào)節(jié)細(xì)胞功能的研究顯示，M 蛋白比 N 蛋白更能有效
上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文12 年， Roux 等[71]建立了 BioID 方法，利用 biotin ligase 在細(xì)胞內(nèi)白有相互作用的附近的蛋白。但是，biotin ligase 標(biāo)記的周期長導(dǎo)較大，以致檢測到一些不相關(guān)的蛋白。2014 年，Alice YTing[72,7工程改造的抗壞血酸過氧化物酶（APEX2）在底物生物素苯酚作 1 毫秒的短暫時間標(biāo)記細(xì)胞中小于 20 納米半徑區(qū)域內(nèi)所有的蛋白譜鑒定標(biāo)記的蛋白質(zhì)，該項技術(shù)的原理見圖 1-3。該團(tuán)隊使用這項近 500 種位于線粒體基質(zhì)中的蛋白質(zhì)。2015 年，MIC 等[74]成功利纖毛的蛋白質(zhì)譜，意外地在纖毛里發(fā)現(xiàn)了信號分子 PKA、AMPK用蛋白質(zhì)譜方法闡明纖毛突變株 ift27/Bbs19 的分子缺陷。該項技究蛋白質(zhì)之間互作提供了有力的工具，可以真實地反映活細(xì)胞內(nèi)蛋用，而且操作過程簡單，易于掌握。2018 年，就有研究者通-FGF1 融合蛋白標(biāo)記揭示了 FGFF1 與蛋白多糖 CD44 和 CSPG4 的
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]過表達(dá)SLC9A3R1對MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞增殖的影響[J]. 馬強(qiáng),閆姍姍,樊賽軍,宋娜玲. 腫瘤防治研究. 2014(08)
[2]人肝細(xì)胞肝癌組織中CLDN1和CLDN4的表達(dá)差異及其作用分析[J]. 谷淵,鄺繼孫,趙龍栓. 醫(yī)藥論壇雜志. 2012(06)
碩士論文
[1]CLDN4在PRRSV感染Marc-145細(xì)胞中的作用[D]. 汪曉飛.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
本文編號：3219093
【文章來源】：上海海洋大學(xué)上海市
【文章頁數(shù)】：63 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
PEDV基因組結(jié)構(gòu)示意圖
圖 1-2 PEDV 基因組復(fù)制[[45]Figure 1-2 The replication of PEDV[45]1.2 冠狀病毒 M 蛋白的研究進(jìn)展冠狀病毒感染細(xì)胞后，病毒蛋白不僅通過阻斷一條或多條蛋白的干擾素和NF-κB 信號通路增強(qiáng)病毒的復(fù)制[46,47]，而且通過不同的路徑和靶點拮抗先天性免疫應(yīng)答[46]，導(dǎo)致細(xì)胞轉(zhuǎn)錄模式、細(xì)胞循環(huán)周期、凋亡途徑等發(fā)生改變[48]。M 蛋白是冠狀病毒的主要結(jié)構(gòu)蛋白之一，屬于膜糖蛋白，具有高度保守的糖基化序列，它在病毒和宿主細(xì)胞之間的互作過程中發(fā)揮重要作用[49]。M 蛋白含有三個跨膜結(jié)構(gòu)域，從 N 端開始依次為 TM1、TM2 和 TM3，主要聚集在高爾基體復(fù)合物，通過與 S 蛋白和 N 蛋白的相互作用參與病毒的組裝[50]，負(fù)責(zé)將病毒 RNA 包裝成成熟的病毒粒子。在病毒裝配期間將核衣殼連接到囊膜上，決定病毒粒子的裝配位點、病毒成熟及出芽位點[51]。病毒感染、復(fù)制期間，宿主的先天性免疫應(yīng)答是抗病毒的第一道屏障，在冠狀病毒蛋白拮抗宿主的先天性免疫應(yīng)答研究中，M 蛋白是近幾年研究的熱點之一。SARS-CoV 結(jié)構(gòu)蛋白調(diào)節(jié)細(xì)胞功能的研究顯示，M 蛋白比 N 蛋白更能有效
上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文12 年， Roux 等[71]建立了 BioID 方法，利用 biotin ligase 在細(xì)胞內(nèi)白有相互作用的附近的蛋白。但是，biotin ligase 標(biāo)記的周期長導(dǎo)較大，以致檢測到一些不相關(guān)的蛋白。2014 年，Alice YTing[72,7工程改造的抗壞血酸過氧化物酶（APEX2）在底物生物素苯酚作 1 毫秒的短暫時間標(biāo)記細(xì)胞中小于 20 納米半徑區(qū)域內(nèi)所有的蛋白譜鑒定標(biāo)記的蛋白質(zhì)，該項技術(shù)的原理見圖 1-3。該團(tuán)隊使用這項近 500 種位于線粒體基質(zhì)中的蛋白質(zhì)。2015 年，MIC 等[74]成功利纖毛的蛋白質(zhì)譜，意外地在纖毛里發(fā)現(xiàn)了信號分子 PKA、AMPK用蛋白質(zhì)譜方法闡明纖毛突變株 ift27/Bbs19 的分子缺陷。該項技究蛋白質(zhì)之間互作提供了有力的工具，可以真實地反映活細(xì)胞內(nèi)蛋用，而且操作過程簡單，易于掌握。2018 年，就有研究者通-FGF1 融合蛋白標(biāo)記揭示了 FGFF1 與蛋白多糖 CD44 和 CSPG4 的
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]過表達(dá)SLC9A3R1對MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞增殖的影響[J]. 馬強(qiáng),閆姍姍,樊賽軍,宋娜玲. 腫瘤防治研究. 2014(08)
[2]人肝細(xì)胞肝癌組織中CLDN1和CLDN4的表達(dá)差異及其作用分析[J]. 谷淵,鄺繼孫,趙龍栓. 醫(yī)藥論壇雜志. 2012(06)
碩士論文
[1]CLDN4在PRRSV感染Marc-145細(xì)胞中的作用[D]. 汪曉飛.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
本文編號：3219093
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