單核細胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes, Lm）是一種重要的革蘭氏陽性人畜共患食源性致病菌。分解代謝物控制蛋白CcpA （catabolite control protein A）是一種具有多效性功能的調控蛋白。在革蘭氏陽性菌中,CcpA不僅參與碳分解代謝物阻遏（carbon catabolite repression, CCR）效應,還參與生物被膜形成和毒力基因表達等多種生理過程。Lm中也存在CcpA的編碼基因ccpA,但其多效功能未有文獻闡明,因此,本研究通過構建CcpA缺失菌株,比較Lm野生株EGDe和CcpA缺失株EGDeAccpA在菌落形態(tài)、鞭毛運動、碳源利用和生物被膜形成等的差異,初步探索CcpA在Lm中的多效功能。實驗結果如下：1. CcpA在Lm菌落形態(tài)、鞭毛運動和生長代謝中具有重要作用。缺失ccpA基因后：細菌在固體BHI平板上菌落直徑增大,邊緣變的不規(guī)則；細菌喪失了運動能力,顯微鏡下觀察不到鞭毛存在；缺失株不能在添加了葡萄糖的基礎培養(yǎng)基MEM中生長,但在LB培養(yǎng)基中的生長速度加快,生物量增加。2. CcpA在Lm生物被膜形成中具有重要作用... 

【文章來源】：華中師范大學湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 引言
    1.1 單核細胞增生李斯特菌的生理特性
    1.2 單核細胞增生李斯特菌的入侵機制
    1.3 CcpA因子與碳分解代謝物阻遏(CCR)的關系
    1.4 CcpA在其它生理活動中的功能
        1.4.1 CcpA對糖酵解途徑的促進作用
        1.4.2 CcpA對有氧呼吸作用的抑制
        1.4.3 CcpA對生物被膜形成的影響
    1.5 單核細胞增生李斯特菌中CcpA的功能研究進展
第二章 構建單核細胞增生李斯特菌CcpA缺失和回復菌株
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗菌株及質粒
        2.1.2 主要實驗儀器
        2.1.3 實驗藥品及配置
        2.1.4 引物
    2.2 實驗方法
        2.2.1 大腸桿菌DH5a感受態(tài)的制備
        2.2.2 單核細胞增生李斯特菌EGDe感受態(tài)細胞的制備
        2.2.3 CcpA缺失菌株的構建
        2.2.4 α—葡萄糖苷酶活性的檢測
        2.2.5 構建單核細胞增生李斯特菌ccpA缺失的回復菌株
    2.3 實驗結果與分析
        2.3.1 重組載體pUC18-ccpA(C)的構建結果
        2.3.2 重組載體pUC18-ccpA(C+D)的構建結果
        2.3.3 重組穿梭載體pLSV101-ccpA(C+D)的構建結果
        2.3.4 重組穿梭載體pLSV101-ccpA(C+D)電轉化EGDe后的鑒定結果
        2.3.5 EGDe△ccpA的鑒定結果
        2.3.6 CcpA缺失對α-葡萄糖苷酶活性的影響
        2.3.7 重組載體T-ccpA的構建結果
    2.4 討論
第三章 CcpA在單核細胞增生李斯特菌生理功能中的作用
    3.1 實驗材料
        3.1.1 實驗菌株
        3.1.2 藥品及配制
    3.2 實驗方法
        3.2.1 菌落形態(tài)及大小的觀察方法
        3.2.2 生長曲線的測定方法
        3.2.3 細菌運動的觀察方法
        3.2.4 細菌鞭毛形態(tài)及運動的觀察方法
    3.3 實驗結果及分析
        3.3.1 ccpA缺失對菌落形態(tài)及大小的影響
        3.3.2 ccpA缺失對細菌生長的影響
        3.3.3 ccpA缺失對細菌運動性的影響
        3.3.4 ccpA缺失對細菌的鞭毛生長情況的影響
第四章 CcpA在單核細胞增生李斯特菌中生物被膜形成中的作用
    4.1 實驗材料
        4.1.1 實驗菌株
        4.1.2 藥品及配制
    4.2 實驗方法
        4.2.1 生物被膜的制備
        4.2.2 觀察生物被膜的形態(tài)
    4.3 實驗結果及分析
第五章 CcpA在單核細胞增生李斯特菌CCR效應中的作用
    5.1 實驗材料
        5.1.1 菌株
        5.1.2 實驗藥品及配置
    5.2 實驗方法
        5.2.1 培養(yǎng)基準備
        5.2.2 測定生長曲線
    5.3 實驗結果及分析
參考文獻
攻讀學位期間取得的研究成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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[2]InlA和InlB介導單核細胞增生李斯特菌入侵宿主細胞分子機制的研究進展[J]. 馮瑩穎,張強,黃蘭紅,秦龍娟,羅勤.  微生物學通報. 2009(12)
[3]單核細胞增生李斯特菌PrfA蛋白轉錄調控毒力基因表達的分子機制[J]. 羅勤,張曉莉,李兵,馮愛平,錢躍.  微生物學通報. 2008(02)
[4]β-葡萄糖苷酶活性測定方法的研究進展[J]. 李華,高麗.  食品與生物技術學報. 2007(02)
[5]枯草芽孢桿菌ccpA基因敲除及對其核黃素產量的影響[J]. 應明,班睿.  微生物學報. 2006(01)
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[7]單核細胞增生李斯特菌簡介[J]. 董麗麗,王春生,安笑秋,韓立卓.  中國鄉(xiāng)村醫(yī)藥. 2000(12)



本文編號：3216729