單核細(xì)胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes, Lm）是一種重要的革蘭氏陽性人畜共患食源性致病菌。分解代謝物控制蛋白CcpA （catabolite control protein A）是一種具有多效性功能的調(diào)控蛋白。在革蘭氏陽性菌中,CcpA不僅參與碳分解代謝物阻遏（carbon catabolite repression, CCR）效應(yīng),還參與生物被膜形成和毒力基因表達(dá)等多種生理過程。Lm中也存在CcpA的編碼基因ccpA,但其多效功能未有文獻(xiàn)闡明,因此,本研究通過構(gòu)建CcpA缺失菌株,比較Lm野生株EGDe和CcpA缺失株EGDeAccpA在菌落形態(tài)、鞭毛運(yùn)動(dòng)、碳源利用和生物被膜形成等的差異,初步探索CcpA在Lm中的多效功能。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：1. CcpA在Lm菌落形態(tài)、鞭毛運(yùn)動(dòng)和生長(zhǎng)代謝中具有重要作用。缺失ccpA基因后：細(xì)菌在固體BHI平板上菌落直徑增大,邊緣變的不規(guī)則；細(xì)菌喪失了運(yùn)動(dòng)能力,顯微鏡下觀察不到鞭毛存在；缺失株不能在添加了葡萄糖的基礎(chǔ)培養(yǎng)基MEM中生長(zhǎng),但在LB培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)速度加快,生物量增加。2. CcpA在Lm生物被膜形成中具有重要作用... 

【文章來源】：華中師范大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 引言
    1.1 單核細(xì)胞增生李斯特菌的生理特性
    1.2 單核細(xì)胞增生李斯特菌的入侵機(jī)制
    1.3 CcpA因子與碳分解代謝物阻遏(CCR)的關(guān)系
    1.4 CcpA在其它生理活動(dòng)中的功能
        1.4.1 CcpA對(duì)糖酵解途徑的促進(jìn)作用
        1.4.2 CcpA對(duì)有氧呼吸作用的抑制
        1.4.3 CcpA對(duì)生物被膜形成的影響
    1.5 單核細(xì)胞增生李斯特菌中CcpA的功能研究進(jìn)展
第二章 構(gòu)建單核細(xì)胞增生李斯特菌CcpA缺失和回復(fù)菌株
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)菌株及質(zhì)粒
        2.1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)藥品及配置
        2.1.4 引物
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 大腸桿菌DH5a感受態(tài)的制備
        2.2.2 單核細(xì)胞增生李斯特菌EGDe感受態(tài)細(xì)胞的制備
        2.2.3 CcpA缺失菌株的構(gòu)建
        2.2.4 α—葡萄糖苷酶活性的檢測(cè)
        2.2.5 構(gòu)建單核細(xì)胞增生李斯特菌ccpA缺失的回復(fù)菌株
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        2.3.1 重組載體pUC18-ccpA(C)的構(gòu)建結(jié)果
        2.3.2 重組載體pUC18-ccpA(C+D)的構(gòu)建結(jié)果
        2.3.3 重組穿梭載體pLSV101-ccpA(C+D)的構(gòu)建結(jié)果
        2.3.4 重組穿梭載體pLSV101-ccpA(C+D)電轉(zhuǎn)化EGDe后的鑒定結(jié)果
        2.3.5 EGDe△ccpA的鑒定結(jié)果
        2.3.6 CcpA缺失對(duì)α-葡萄糖苷酶活性的影響
        2.3.7 重組載體T-ccpA的構(gòu)建結(jié)果
    2.4 討論
第三章 CcpA在單核細(xì)胞增生李斯特菌生理功能中的作用
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)菌株
        3.1.2 藥品及配制
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 菌落形態(tài)及大小的觀察方法
        3.2.2 生長(zhǎng)曲線的測(cè)定方法
        3.2.3 細(xì)菌運(yùn)動(dòng)的觀察方法
        3.2.4 細(xì)菌鞭毛形態(tài)及運(yùn)動(dòng)的觀察方法
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析
        3.3.1 ccpA缺失對(duì)菌落形態(tài)及大小的影響
        3.3.2 ccpA缺失對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)的影響
        3.3.3 ccpA缺失對(duì)細(xì)菌運(yùn)動(dòng)性的影響
        3.3.4 ccpA缺失對(duì)細(xì)菌的鞭毛生長(zhǎng)情況的影響
第四章 CcpA在單核細(xì)胞增生李斯特菌中生物被膜形成中的作用
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)菌株
        4.1.2 藥品及配制
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 生物被膜的制備
        4.2.2 觀察生物被膜的形態(tài)
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析
第五章 CcpA在單核細(xì)胞增生李斯特菌CCR效應(yīng)中的作用
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.1 菌株
        5.1.2 實(shí)驗(yàn)藥品及配置
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 培養(yǎng)基準(zhǔn)備
        5.2.2 測(cè)定生長(zhǎng)曲線
    5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3216729