Toll樣受體（Toll-like receptors,TLR）是多細胞生物體內(nèi)參與固有免疫的一類重要模式識別受體,聯(lián)系著生物體的非特異性免疫和特異性免疫功能。本研究首次克隆并報道了含有鴨TLR21基因完整編碼框的cDNA序列,并進行了相關(guān)研究。主要內(nèi)容如下:1鴨TLR21基因的分子克隆、序列分析及組織表達譜檢測利用PCR和RACE技術(shù),根據(jù)禽類TLR21基因序列設(shè)計引物,成功克隆了鴨TLR21基因,并將此長為3009 bp的cDNA序列提交至NCBI（GenBank登錄號:KY829021）。鴨TLR21基因序列包含一個長為2931 bp的開放閱讀框,編碼976個氨基酸,氨基酸序列對比顯示與鵝TLR21相似度最高,達92%;其次是雞TLR21,相似度為76%;鴨TLR21與鱷魚和蠑螈的TLR21氨基酸序列相似度高于魚類TLR21;與人TLR9相似度僅為28%。預(yù)測的鴨TLR21二級結(jié)構(gòu)顯示其具有典型的TLR結(jié)構(gòu),包括信號肽、胞外區(qū)、跨膜區(qū)和胞內(nèi)區(qū);三級結(jié)構(gòu)預(yù)測結(jié)果顯示鴨TLR21或以單體形式存在,或以受體-配體的對稱二聚體形式存在。鴨TLR21的組織分布規(guī)律顯示鴨TLR21廣泛存在于... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
第一章 文獻綜述
    1 TLR21基因的研究進展
        1.1 TLR21的結(jié)構(gòu)
        1.2 TLR21在禽類體內(nèi)的分布
        1.3 TLR21的功能
    2 本試驗的研究目的及意義
第二章 鴨TLR21基因的克隆、序列分析及組織表達譜
    1 試驗材料
        1.1 試驗動物
        1.2 菌種與質(zhì)粒
        1.3 主要試驗儀器和設(shè)備
        1.4 主要試驗試劑
        1.5 相關(guān)溶液配制
    2 試驗方法
        2.1 鴨TLR21部分cDNA片段的擴增
        2.2 目的基因的TA克隆與測序
        2.3 鴨TLR21的cDNA全長擴增
        2.4 鴨TLR21基因的序列分析
        2.5 鴨TLR21的組織表達譜
    3 試驗結(jié)果
        3.1 鴨TLR21的cDNA序列
        3.2 鴨TLR21的核酸及氨基酸序列分析
        3.3 鴨TLR21氨基酸多序列對比及進化樹構(gòu)建
        3.4 鴨與其他動物TLR21蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)的比對分析
        3.5 鴨TLR21三級結(jié)構(gòu)的預(yù)測
        3.6 鴨TLR21的組織表達譜
    4 討論
    5 本章小結(jié)
第三章 鴨TLR21的免疫學(xué)活性檢測
    1 試驗材料
        1.1 試驗動物及毒株
        1.2 主要試驗儀器和設(shè)備
        1.3 主要試驗試劑
    2 試驗方法
        2.1 鴨胚成纖維細胞模型的建立
        2.2 病毒感染雛鴨模型的建立
        2.3 病毒或刺激劑處理后細胞(組織)的免疫應(yīng)答情況檢測
        2.4 過表達TLR21及雙熒光素酶NF-κB報告基因活性檢測
        2.5 靶向鴨TLR21基因的干擾RNA試驗
        2.6 TLR21對DPV在DEFs中復(fù)制的影響
    3 試驗結(jié)果
        3.1 過表達TLR21及雙熒光素酶NF-κB報告基因活性檢測
        3.2 刺激劑處理后DEFs免疫應(yīng)答的檢測
        3.3 靶向鴨TLR21基因的干擾RNA試驗結(jié)果
        3.4 病毒感染鴨胚成纖維細胞后相關(guān)細胞因子檢測結(jié)果
        3.5 雛鴨感染病毒后其脾臟和法氏囊中相關(guān)細胞因子檢測結(jié)果
        3.6 TLR21對DPV在DEFs中復(fù)制的影響
    4 討論
    5 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻
致謝
作者簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
[1]鴨胚成纖維細胞培養(yǎng)、傳代及保存方法的研究[J]. 許靜,李進軍,熊勝,陳黎,楊倩,盧立志.  中國家禽. 2012(13)
[2]禽類Toll樣受體的分子進化與作用機制研究進展[J]. 陳浩,楊慶利,韋平.  中國家禽. 2010(16)
[3]CpG序列的免疫激活機理及應(yīng)用[J]. 陸軍,嚴維耀,鄭兆鑫.  生物技術(shù)通報. 1999(05)

博士論文
[1]鴨、鵝PRRs的克隆、分析及分布研究[D]. WAEL M.K.ELFEIL （維爾）.吉林大學(xué) 2012



本文編號：3203679