J亞群禽白血病病毒（Avian leukosis virus subgroup J,ALV-J）、馬立克氏病病毒（Marek’s disease virus,MDV）、豬圓環(huán)病毒病毒2型（Porcine circovirus 2,PCV2）這三種病毒都可以引起被感染動物免疫抑制,造成動物機(jī)體免疫力下降,從而利于其它病原菌的入侵,引起兩種或多種疾病的并發(fā)感染,增加了診斷和治療的難度。目前MDV與PCV2主要通過接種疫苗來進(jìn)行防控,雖然在一定程度上減少了疾病的發(fā)生,但同時也加劇了毒株的變異速度。ALV-J主要通過淘汰方式來進(jìn)行凈化,但2018年中國幾個省份幾乎同時爆發(fā)由ALV-J引起的髓細(xì)胞瘤病,使得ALV-J的凈化之路愈發(fā)艱巨。而抗生素添加劑的使用嚴(yán)重破壞了動物腸道的微生態(tài)平衡,藥物殘留也影響了畜產(chǎn)品的品質(zhì)和人類健康。因此,急需開發(fā)出一種無毒副作用又不會使病原菌產(chǎn)生耐藥性的藥物來解決這一問題。防御素具廣譜抗微生物活性,能有效地殺滅病毒、細(xì)菌、真菌、螺旋體等病原微生物,對腫瘤細(xì)胞也有細(xì)胞毒作用,且迄今尚未發(fā)現(xiàn)有致病菌株對其產(chǎn)生耐藥性。許多證據(jù)表明,防御素對囊膜病毒有顯著抑制作用。β-防御素... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
符號說明
中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 抗菌肽簡介
        1.1.1 抗菌肽的定義
        1.1.2 抗菌肽的分類
    1.2 抗菌肽家族成員-防御素簡介
        1.2.1 防御素的定義
        1.2.2 防御素的分類
        1.2.3 防御素的生物學(xué)作用及機(jī)制
    1.3 禽β-防御素的研究進(jìn)展
        1.3.1 禽β-防御素的結(jié)構(gòu)特征及生物學(xué)特性
        1.3.2 禽β-防御素的研究展望
    1.4 ALV-J、MDV、PCV2 簡介
        1.4.1 ALV-J的病原學(xué)與致病性
        1.4.2 MDV的病原學(xué)與致病性
        1.4.3 PCV2 的病原學(xué)與致病性
    1.5 研究目的與意義
2 材料與方法
    2.1 試驗材料
        2.1.1 病毒、載體、菌種、細(xì)胞和試驗動物
        2.1.2 試驗試劑
        2.1.3 主要試劑的配制
        2.1.4 主要試驗儀器
    2.2 試驗方法
        2.2.1 AvBD10 目的基因的獲取
            2.2.1.1 AvBD10 蛋白引物設(shè)計與合成
            2.2.1.2 組織總RNA的提取
            2.2.1.3 瓊脂糖凝膠電泳獲取目的片段
            2.2.1.4 目的片段的回收
        2.2.2 重組AvBD7和AvBD10 的原核表達(dá)
            2.2.2.1 融合表達(dá)載體的構(gòu)建
            2.2.2.2 重組AvBD7和AvBD10 的誘導(dǎo)與表達(dá)
        2.2.3 AvBD7 蛋白和AvBD10 蛋白的純化與檢驗
            2.2.3.1 AvBD7 蛋白和AvBD10 蛋白的純化
            2.2.3.2 蛋白濃度的測定
            2.2.3.3 SDS-PAGE和 western blot檢驗蛋白純化結(jié)果
        2.2.4 重組AvBD7和AvBD10 蛋白的體外抗病毒試驗
            2.2.4.1 重組AvBD7和AvBD10 蛋白對細(xì)胞活性的影響
            2.2.4.2 qPCR檢測AvBD7和AvBD10 蛋白體外抗病毒效果
            2.2.4.3 Western blot檢測AvBD7和AvBD10 蛋白體外抗病毒效果
        2.2.5 AvBD7和Av BD10 蛋白體內(nèi)抗MDV試驗
            2.2.5.1 體內(nèi)抗病毒試驗設(shè)計
            2.2.5.2 大體剖檢病變觀察
            2.2.5.3 血涂片觀察
            2.2.5.4 組織病理學(xué)觀察
3 結(jié)果與分析
    3.1 目的基因的獲取
        3.1.1 設(shè)計引物提取目的基因
        3.1.2 重組質(zhì)粒鑒定及序列對比
    3.2 AvBD7和AvBD10 蛋白原核表達(dá)
        3.2.1 原核表達(dá)載體構(gòu)建
        3.2.2 AvBD7和Av BD10 蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
        3.2.3 純化AvBD7和AvBD10 蛋白的濃度測定
        3.2.4 純化AvBD7和AvBD10 蛋白的SDS-PAGE和western blot檢測
    3.3 AvBD7和AvBD10 蛋白體外抗病毒試驗
        3.3.1 AvBD7和AvBD10蛋白對細(xì)胞的毒性檢測
        3.3.2 qPCR檢測AvBD7和AvBD10 蛋白體外抗病毒效果
        3.3.3 Western blot檢測AvBD7和AvBD10 蛋白體外抗病毒效果
    3.4 AvBD7和AvBD10 蛋白體內(nèi)抗MDV試驗
        3.4.1 大體剖檢病變觀察
        3.4.2 血涂片觀察
        3.4.3 組織病理學(xué)觀察
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]抗菌肽生物活性及其作用機(jī)理研究進(jìn)展[J]. 王為棟,孫海娟.  當(dāng)代畜牧. 2018(33)
[2]抗菌肽的研究進(jìn)展[J]. 李翠玲,劉勇.  嶺南急診醫(yī)學(xué)雜志. 2018(05)
[3]近年來ALV-J的國內(nèi)外研究進(jìn)展[J]. 徐晴晴,王峰,孫培,王文秀.  中國獸醫(yī)學(xué)報. 2018(09)
[4]雞馬立克氏病的流行特點、臨床癥狀、鑒別和防控[J]. 肖秋紅.  現(xiàn)代畜牧科技. 2018(08)
[5]抗菌肽研究進(jìn)展及應(yīng)用[J]. 甄陽光.  飼料博覽. 2018(07)
[6]抗菌肽及類抗菌肽的設(shè)計、合成及應(yīng)用[J]. 周欣宇,周春才.  化學(xué)進(jìn)展. 2018(07)
[7]豬圓環(huán)病毒2型的研究進(jìn)展[J]. 沈強(qiáng).  獸醫(yī)導(dǎo)刊. 2018(13)
[8]抗菌肽與類抗菌肽研究[J]. 孫榕壑.  當(dāng)代化工研究. 2018(05)
[9]抗菌肽抗細(xì)菌機(jī)理研究進(jìn)展[J]. 單安山,田昊天,邵長軒,譚鵬,來振衡.  東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2018(03)
[10]抗菌肽的作用機(jī)理及應(yīng)用[J]. 王亞平,余維維,秦夢茹,楊勇,金德俊,饒犇.  湖北農(nóng)業(yè)科學(xué). 2018(05)



本文編號：3203672