豬細(xì)小病毒病（Porcine parvovirus infection,PPI）是由豬細(xì)小病毒（Porcine parvovirus,PPV）引起的一種病毒性傳染病。該病主要臨床表現(xiàn)為胚胎以及胎兒的感染,發(fā)生畸形胎、木乃伊胎甚至死胎。PPV是造成母豬繁殖障礙的主要原因之一,對養(yǎng)豬業(yè)構(gòu)成了巨大威脅,造成了全球范圍內(nèi)的巨大經(jīng)濟(jì)損失。自噬是細(xì)胞自我防御和自我保護(hù)的一種生理過程,盡管許多病毒在進(jìn)入細(xì)胞或復(fù)制時可引起細(xì)胞自噬,但自噬和PPV感染之間的關(guān)系尚未見報道。因此本文將研究PPV感染豬睪丸細(xì)胞（ST）后對細(xì)胞自噬的影響,同時研究自噬是否能夠促進(jìn)PPV病毒的復(fù)制。本文應(yīng)用Western blot、間接免疫熒光和熒光定量PCR方法對PPV感染ST細(xì)胞后自噬的發(fā)生及其自噬與病毒復(fù)制之間的互作機(jī)制進(jìn)行了研究。結(jié)果如下:Western blot實驗表明,隨著時間延長,雷帕霉素處理組和PPV感染組與正常對照組相比,LC3-I向LC3-II的轉(zhuǎn)化增加,p62的水平顯著降低。間接免疫熒光檢測表明PPV感染ST細(xì)胞中出現(xiàn)大量陽性熒光斑點狀GFP-LC3蛋白,與雷帕霉素處理組相似,而在正常對照組細(xì)胞中GFP-... 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
英文摘要
1 引言
    1.1 豬細(xì)小病毒病的研究進(jìn)展
        1.1.1 豬細(xì)小病毒的基因組結(jié)構(gòu)
        1.1.2 豬細(xì)小病毒的主要蛋白和功能
        1.1.3 豬細(xì)小病毒病流行病學(xué)
        1.1.4 豬細(xì)小病毒致病機(jī)制
        1.1.5 豬細(xì)小病毒病臨床癥狀和病理變化
        1.1.6 豬細(xì)小病毒病的診斷
        1.1.7 豬細(xì)小病毒病的防治
    1.2 自噬
        1.2.1 自噬分類及特征
        1.2.2 自噬的過程
        1.2.3 自噬的檢測
        1.2.4 自噬的生理意義
        1.2.5 自噬與病毒感染的相互作用
    1.3 研究目的和意義
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗病毒株、細(xì)胞與菌種
        2.1.2 試劑盒、工具酶、抗體以及試劑
        2.1.3 主要試劑的配制及保存
        2.1.4 實驗儀器與設(shè)備
    2.2 實驗方法
        2.2.1 PPV感染ST細(xì)胞條件的建立
        2.2.2 Westernblot檢測PPV感染ST細(xì)胞后自噬相關(guān)蛋白的變化
        2.2.3 間接免疫熒光檢測PPV感染ST細(xì)胞后GFP-LC3熒光變化
        2.2.4 透射電鏡觀察PPV誘導(dǎo)ST細(xì)胞的自噬體形成
        2.2.5 Westernblot檢測自噬對病毒復(fù)制的影響
        2.2.6 TCID50方法檢測自噬對病毒復(fù)制的影響
        2.2.7 實時熒光定量PCR檢測自噬對病毒復(fù)制的影響
        2.2.8 統(tǒng)計學(xué)分析
3 結(jié)果
    3.1 PPV感染ST細(xì)胞條件的建立
        3.1.1 PPV感染ST細(xì)胞CPE的觀察
        3.1.2 PPV感染ST細(xì)胞后的PCR鑒定
        3.1.3 PPVTCID50的測定
    3.2 PPV誘導(dǎo)ST細(xì)胞自噬的產(chǎn)生
        3.2.1 Westernblot檢測PPV感染ST細(xì)胞后自噬相關(guān)蛋白的變化
        3.2.2 間接免疫熒光檢測PPV感染ST細(xì)胞后GFP-LC3熒光變化
        3.2.3 PPV感染ST細(xì)胞后自噬泡的電鏡觀察
    3.3 自噬對病毒復(fù)制的影響
        3.3.1 Westernblot分析自噬對病毒復(fù)制的影響
        3.3.2 病毒滴度TCID50的測定
        3.3.3 實時熒光定量PCR檢測病毒拷貝數(shù)
4 討論
    4.1 PPV病毒誘導(dǎo)ST細(xì)胞自噬的發(fā)生
        4.1.1 Westernblot檢測PPV感染ST細(xì)胞后自噬相關(guān)蛋白的變化
        4.1.2 間接免疫熒光檢測PPV感染ST細(xì)胞后GFP-LC3熒光變化
        4.1.3 透射電鏡分析病毒誘導(dǎo)自噬體的產(chǎn)生
    4.2 PPV感染ST細(xì)胞引起自噬并促進(jìn)其復(fù)制
        4.2.1 Westernblot分析自噬對病毒復(fù)制的影響
        4.2.2 病毒滴度TCID50的檢測和分析
        4.2.3 PPV拷貝數(shù)的檢測和分析
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號：3201481