小鼠的繁殖周期短,遺傳信息豐富,其卵子、胚胎易于獲得和培養(yǎng),是進(jìn)行ICSI研究的理想動(dòng)物模型。但小鼠的Piezo-ICSI技術(shù)與人類卵子的ICSI技術(shù)在操作溫度、破膜原理等方面存在較大差異,不能夠很好地模擬人類卵子的ICSI操作。我們的前期研究通過(guò)改良顯微持卵針建立了一種非Piezo依賴的小鼠ICSI技術(shù)（New-ICSI, N-ICSI）,在保證高存活率（83%）的前提下最大程度地貼近了人類的ICSI操作。然而該技術(shù)與Piezo-ICSI相比其卵子存活率和囊胚發(fā)育率還不是非常理想,尚待進(jìn)一步的優(yōu)化。本研究將原N-ICSI的穿刺破膜的操作分割成淺吸持淺穿刺和深吸持深穿刺兩步后顯著提高了該技術(shù)的卵子存活率（92.5%V.S.81.1%,p<0.01）,其操作效率也顯著提高（18.9枚/小時(shí)V.S.15.6枚/小時(shí),p<0.01）。本研究為小鼠非Piezo依賴的ICSI操作方法的應(yīng)用和推廣奠定了堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ),為人類ICSI技術(shù)安全性的動(dòng)物模型研究（如精子弱激活力模型研究等）提供了更便捷高效的途徑。在人類臨床應(yīng)用中有2%-3%的ICSI周期完全受精失敗,其主要原因在于卵子未能被激活。... 

【文章來(lái)源】：廣西大學(xué)廣西壯族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：59 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮略表
第一部分 文獻(xiàn)綜述
    ICSI技術(shù)的研究和應(yīng)用
    1 ICSI技術(shù)的建立
    2 影響ICSI結(jié)果的因素
        2.1 卵子因素
        2.2 精子因素
        2.3 操作前的卵子、精子預(yù)處理
        2.4 操作后的卵子活化發(fā)生Ca~(2+)震蕩的模式及輔助激活
        2.5 顯微操作的條件
    3 小鼠ICSI技術(shù)的現(xiàn)狀和存在的問(wèn)題及其應(yīng)用研究
        3.1 小鼠ICSI技術(shù)的現(xiàn)狀和存在的問(wèn)題
        3.2 小鼠ICSI技術(shù)應(yīng)用于受精機(jī)理模型研究
    4 本研究的目的與意義
第二部分 實(shí)驗(yàn)研究
    第一章 實(shí)驗(yàn)材料及方法
        1 主要儀器設(shè)備
        2 常用耗材及試劑
            2.1 耗材
            2.2 常用試劑與溶液配制
        3 撿卵針制備和改良持卵針制作
            3.1 撿卵針的制備
            3.2 改良持卵針的制作
        4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        5 卵子的準(zhǔn)備
        6 精子的準(zhǔn)備
        7 ICSI操作
            7.1 ICSI前準(zhǔn)備工作
            7.2 ICSI操作
        8 胚胎培養(yǎng)與觀察
        9 SCSA(Sperm Chromatin Structure Assay)
        10 統(tǒng)計(jì)分析
    第二章 非Piezo依賴的小鼠顯微授精新技術(shù)的改良
        1 引言
        2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果
            2.1 兩步法N-ICSI技術(shù)對(duì)卵子存活率及受精率的影響
            2.2 兩步法N-ICSI技術(shù)對(duì)胚胎發(fā)育的影響
            2.3 N-ICSI與兩步法N-ICSI操作效率的比較
        3 分析與討論
    第三章 非Piezo依賴的小鼠顯微授精新技術(shù)的應(yīng)用
        1 引言
        2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果
            2.1 溫度因素對(duì)脫尾后精子激活力的影響
            2.2 時(shí)間因素對(duì)脫尾后精子激活力和胚胎發(fā)育的影響
            2.3 輔助激活對(duì)37℃預(yù)孵的脫尾精子所得胚胎的受精和發(fā)育影響
            2.4 脫尾后于37℃預(yù)孵處理對(duì)精于DNA完整性的影響
        3 分析與討論
總結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文情況


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]小鼠卵子胞膜在顯微穿刺中存活的膜特性因素研究[J]. 鄧?yán)?曾明,匡延平,鄔玲仟,呂祁峰.  生殖與避孕. 2011(12)
[2]Immunofluorescent Study of Human MⅡ Oocytes Failed to Fertilize after IVF and ICSI[J]. Hai-ning LUO1,2,Gui-jin ZHU2,Juan HU2,Yan-lin WANG2,Yu-lan WEI2 1. The Center for Reproductive Medicine,Tianjin Central Hospital of Gynecology and Obstetrics,Tianjin 300052, China 2. Department of Gynecology and Obstetrics,Tongji Hospital of Tongji Medical College,Huazhong University of Science and Technology,Wuhan 430030,China.  Journal of Reproduction and Contraception. 2010(01)
[3]卵胞漿內(nèi)單精子注射中小鼠卵細(xì)胞第一極體位置和形態(tài)對(duì)受精率和受精卵質(zhì)量的影響[J]. 彭弋峰,鮑時(shí)華,彭守靜.  生殖醫(yī)學(xué)雜志. 2004(02)
[4]水牛精子胞質(zhì)內(nèi)顯微受精技術(shù)的初步研究[J]. 張艷玲,牛向麗,石德順,盧克煥.  草食家畜. 2002(04)
[5]顯微注射受精時(shí)第一極體位置和卵母細(xì)胞膜穿破類型對(duì)受精和胚胎發(fā)育的影響[J]. 羅海寧,劉群,朱桂金.  華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2002(04)
[6]用射出精子、附睪精子、睪丸精子顯微授精治療男性不育[J]. 李滿,莊廣倫,李蓉,張敏芳,周燦權(quán),王長(zhǎng)希,徐艷文,梅驊.  中華外科雜志. 2000(04)
[7]小鼠卵細(xì)胞質(zhì)內(nèi)顯微注入單精子受精的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 楊益壽,熊素芳,龍文,李鳴,夏明珠,汪昌介.  解剖學(xué)報(bào). 1998(04)
[8]卵漿內(nèi)單精子顯微注射[J]. 李蓉,莊廣倫.  生殖醫(yī)學(xué)雜志. 1997(02)

博士論文
[1]水牛卵母細(xì)胞孤雌激活與體細(xì)胞核移植的研究[D]. 楊素芳.廣西大學(xué) 2002

碩士論文
[1]小鼠ICSI新技術(shù)及其用于提高人類輔助生殖技術(shù)的研究[D]. 曾明.南昌大學(xué) 2011
[2]小鼠ICSI技術(shù)改良及體外畸形孵化與囊胚內(nèi)細(xì)胞團(tuán)分裂風(fēng)險(xiǎn)關(guān)系的研究[D]. 鄧?yán)?中南大學(xué) 2010
[3]牛卵母細(xì)胞胞漿內(nèi)單精子注射的研究[D]. 張營(yíng)霞.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2007



本文編號(hào)：3201040