近年來(lái)我國(guó)出現(xiàn)偽狂犬病毒變異株,導(dǎo)致豬偽狂犬病重新爆發(fā)流行。為研究偽狂犬病毒變異株毒力增強(qiáng)與抗原變異的分子機(jī)制,需要建立該病毒的感染性克隆操作系統(tǒng)。本研究通過(guò)構(gòu)建轉(zhuǎn)移載體pTEGGF,利用同源重組將含有增強(qiáng)型綠色熒光蛋白（enhanced green fluorescent protein,EGFP）表達(dá)框及兩翼各一個(gè)loxp位點(diǎn),插入到偽狂犬病毒變異株P(guān)RV JS-2012 gG編碼區(qū)下游,獲得重組病毒rJS2012-gG/EGFP。將表達(dá)Cre重組酶的質(zhì)粒pcDNA3.1-Cre轉(zhuǎn)染BHK-21細(xì)胞,再感染rJS2012-gG/EGFP,篩選獲得含有單一loxp位點(diǎn)的重組病毒rJS2012-gG/loxp。將rJS2012-gG/loxp基因組、含有EGFP標(biāo)記基因的BAC載體p Belo BAC11-EGFP和pcDNA3.1-cre共轉(zhuǎn)染BHK-21,獲得含有BAC序列插入的重組病毒rJS2012-BAC。一步生長(zhǎng)曲線與空斑試驗(yàn)顯示,重組病毒rJS2012-BAC在體外生長(zhǎng)略慢于親本病毒。本研究成功構(gòu)建了含有BAC載體的重組偽狂犬病毒,為進(jìn)一步建立偽狂犬病毒變異株的感染性克隆操... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào). 2017,25(02)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 病毒和細(xì)胞
    1.2 質(zhì)粒和菌株
    1.3 工具酶和主要試劑
    1.4 引物設(shè)計(jì)
    1.5 轉(zhuǎn)移載體構(gòu)建
        1.5.1 轉(zhuǎn)移載體p TEGGF構(gòu)建
        1.5.2 轉(zhuǎn)移載體p Belo BAC11-EGFP構(gòu)建
    1.6 重組病毒構(gòu)建
        1.6.1 重組病毒r JS2012-g G/EGFP的構(gòu)建
        1.6.2 重組病毒r JS2012-g G/loxp的構(gòu)建
        1.6.3 重組病毒r JS2012-BAC的構(gòu)建
    1.7 重組病毒一步生長(zhǎng)曲線
    1.8 重組病毒空斑實(shí)驗(yàn)
2 結(jié)果
    2.1 轉(zhuǎn)移載體構(gòu)建及鑒定
    2.2 重組病毒篩選及純化
    2.3 重組病毒一步生長(zhǎng)曲線
    2.4 重組病毒空斑大小和形態(tài)
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]免疫后發(fā)病仔豬中偽狂犬病毒的分離和鑒定[J]. 童武,張青占,鄭浩,劉飛,姜一峰,單同領(lǐng),周艷君,童光志.  中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào). 2013(03)
[2]豬偽狂犬病毒浙江株感染性細(xì)菌人工染色體克隆的構(gòu)建[J]. 尹文玲,尹龍勃,葉偉成,孫學(xué)強(qiáng),姚火春,張淼濤,王一成,張存.  病毒學(xué)報(bào). 2010(04)
[3]帶BAC質(zhì)粒的重組偽狂犬病毒的構(gòu)建及其體外生長(zhǎng)特性研究[J]. 彭金美,王瑜,田志軍,周艷君,陳瑾,安同慶,童光志.  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2009(01)
[4]細(xì)菌人工染色體及其在基因組學(xué)研究中的應(yīng)用[J]. 張達(dá).  生物技術(shù)通訊. 2003(05)
[5]Cre重組酶結(jié)構(gòu)與功能的研究進(jìn)展[J]. 王立霞,王勇,胡鳶雷,高音,林忠平.  生物工程學(xué)報(bào). 2002(05)



本文編號(hào)：3201005