硒是人和動(dòng)物體內(nèi)一種重要的微量元素。日糧中硒缺乏會(huì)引發(fā)一系列疾病。肝臟是雞硒缺乏時(shí)的一個(gè)靶器官。硫化氫（H2S）是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的繼NO和CO后的第三類氣體信號(hào)分子,參與了機(jī)體許多系統(tǒng)的生理活動(dòng)。有研究表明內(nèi)源性H2S具有保護(hù)肝臟及調(diào)節(jié)肝臟一些生理功能的作用。H2S在體內(nèi)主要通過(guò)胱硫醚γ裂解酶（Cystathionine γ-lyase, CSE）、胱硫醚p合酶（Cystathionine β-synthase, CBS）和3-巰基丙酮酸硫轉(zhuǎn)移酶（3-mercaptopyruvate sulfurtransferase,3-MST）來(lái)合成。當(dāng)發(fā)生疾病時(shí),機(jī)體內(nèi)源性H2S的含量以及相關(guān)酶的基因表達(dá)量會(huì)發(fā)生改變。但硒缺乏與內(nèi)源性H2S的關(guān)系尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)以雞為試驗(yàn)動(dòng)物,通過(guò)低硒日糧喂養(yǎng)雞15、25、35、45、55、65d來(lái)建立模型,即對(duì)照組飼喂全價(jià)飼料,飼料硒含量為0.15mg/Kg低硒組飼喂低硒日糧,飼料硒含量為0.033mg/Kg。應(yīng)用基因克隆技術(shù)在原核表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)了CSE并制備了多克隆抗體。研究了飼喂低硒日糧對(duì)雞組織中H2S的含量以及促進(jìn)H2S生成的相關(guān)基因（CSE、CBS、3-M... 

【文章來(lái)源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：43 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
CONTENTS
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 硒缺乏對(duì)肝臟的影響
        1.1.1 缺硒與肝臟疾病
        1.1.2 缺硒時(shí)肝臟的病理學(xué)變化
    1.2 H_2S的生物學(xué)功能
        1.2.1 內(nèi)源性H_2S的生成途徑
        1.2.2 H_2S與疾病
        1.2.3 H_2S的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路
        1.2.4 H_2S含量的檢測(cè)方法
    1.3 目的與意義
2 材料與方法
    2.1 試驗(yàn)雞的飼養(yǎng)
    2.2 試驗(yàn)的主要試劑及儀器
        2.2.1 主要儀器
        2.2.2 主要試劑
    2.3 肝組織中H_2S含量的檢測(cè)
    2.4 肝組織中CSE、CBS、3-MST基因mRNA表達(dá)的檢測(cè)
        2.4.1 引物的設(shè)計(jì)與合成
        2.4.2 總RNA的提取
        2.4.3 RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA
        2.4.4 熒光定量PCR擴(kuò)增
    2.5 雞CSE基因的克隆、原核表達(dá)、多克隆抗體的制備
        2.5.1 雞CSE基因序列的克隆與鑒定
        2.5.2 雞CSE基因在大腸桿菌中的表達(dá)、純化和鑒定
        2.5.3 抗雞CSE多克隆抗體的制備
    2.6 雞CSE基因蛋白表達(dá)情況的檢測(cè)
    2.7 試驗(yàn)數(shù)據(jù)的分析與統(tǒng)計(jì)
3 結(jié)果與分析
    3.1 雞CSE多克隆抗體的制備
        3.1.1 雞CSE基因的PCR擴(kuò)增結(jié)果
        3.1.2 雞CSE mRNA基因序列的測(cè)序結(jié)果
        3.1.3 重組表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定
        3.1.4 融合蛋白的表達(dá)、鑒定與純化
        3.1.5 多克隆抗體的制備和鑒定結(jié)果
    3.2 雞肝臟H_2S含量的檢測(cè)結(jié)果
    3.3 雞肝臟CSE、CBS、3-MST mRNA與CSE蛋白表達(dá)的檢測(cè)結(jié)果
4 討論
    4.1 雞CSE的克隆、表達(dá)及多克隆抗體的制備
    4.2 硒缺乏對(duì)雞肝臟中H_2S含量的影響
    4.3 硒缺乏對(duì)雞肝臟中CSE、CBS、3-MST mRNA和CSE蛋白表達(dá)的影響
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]硫化氫對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞膠原Ⅰ和膠原Ⅲ表達(dá)的影響[D]. 張進(jìn)良.青海大學(xué) 2011
[2]硒對(duì)雞肝臟SelW mRNA表達(dá)調(diào)控及缺硒誘導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡的研究[D]. 孫博.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[3]內(nèi)源性CSE/H2S介導(dǎo)缺血后處理對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷的拮抗作用[D]. 謝巍.南華大學(xué) 2008



本文編號(hào)：3199799