豬肌內(nèi)脂肪的沉積是一個(gè)復(fù)雜的生理過程。由于長(zhǎng)期追求高瘦肉率低背膘厚的育種目的,使得肌內(nèi)脂肪含量的下降。提高肌內(nèi)脂肪含量,同時(shí)不影響其它部位脂肪的沉積成為豬育種的一個(gè)重要目標(biāo)。機(jī)體的脂肪組織被限定在特定的部位,并且不同部位的脂肪在脂肪前體細(xì)胞分化與脂肪代謝能力上存在著差異,這為尋找調(diào)控脂肪在不同組織差異沉積的分子機(jī)理提供了可能性。為了解皮下脂肪與肌內(nèi)脂肪差異沉積的分子機(jī)制,我們首先通過基因芯片對(duì)皮下脂肪與肌內(nèi)脂肪的基因表達(dá)譜進(jìn)行比較研究,在此基礎(chǔ)上選擇在兩種組織差異表達(dá)、且對(duì)脂肪分化與沉積起關(guān)鍵調(diào)控作用的PPARy基因?yàn)檠芯繉?duì)象,從miRNA表觀調(diào)控、肌肉分泌因子調(diào)控以及核受體共激活因子影響等角度,進(jìn)一步分析組織間PPARy表達(dá)差異的分子調(diào)控機(jī)制。主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：1、利用Affymetrix表達(dá)譜芯片對(duì)7月齡二花臉豬胸腰接合處的皮下脂肪組織與背最長(zhǎng)肌中肌內(nèi)脂肪組織的mRNA表達(dá)水平進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果顯示有1228個(gè)基因在皮下脂肪中高表達(dá),有965個(gè)基因在肌內(nèi)脂肪中高表達(dá)。通過GO和KEGG分析,發(fā)現(xiàn)皮下脂肪組織在脂肪代謝與脂肪酸代謝方面強(qiáng)于肌內(nèi)脂肪組織。結(jié)果顯示：脂肪分化與沉積的關(guān)鍵基因... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語(yǔ)中英文對(duì)照(Abbreviation)
第一篇 文獻(xiàn)綜述
    第一章 脂肪細(xì)胞分化及信號(hào)調(diào)控
        1 脂肪細(xì)胞的起源
        2 脂肪細(xì)胞的分化過程
        3 脂肪細(xì)胞分化過程中的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子
            3.1 C/EBPs
            3.2 PPARγ
            3.3 SREBP1c
            3.4 KLFs
        4 脂肪細(xì)胞分化過程中的信號(hào)通路
            4.1 Wnt信號(hào)通路
            4.2 TGFβ/BMPs信號(hào)通路
            4.3 胰島素與IGF1信號(hào)通路
            4.4 FGF信號(hào)通路
            4.5 Notch信號(hào)通路
            4.6 DLK/PREF1信號(hào)通路
            4.7 MAPK信號(hào)通路
            4.8 SHH信號(hào)通路
            4.9 其它調(diào)控
        參考文獻(xiàn)
    第二章 去分化脂肪細(xì)胞的研究進(jìn)展
        1 DFAT細(xì)胞的獲得
        2 DFAT細(xì)胞在成脂分化中的優(yōu)勢(shì)
        3 DFAT細(xì)胞的多能性
        4 DFAT細(xì)胞與成熟脂肪細(xì)胞、MSCs細(xì)胞、iPS細(xì)胞的比較
        5 總結(jié)與展望
        參考文獻(xiàn)
    第三章 不同部位脂肪差異的研究
        1 內(nèi)臟脂肪與皮下脂肪在人、小鼠中的差異研究
        2 動(dòng)物生產(chǎn)中不同部位脂肪組織的差異研究
        3 脂肪細(xì)胞的異質(zhì)性
        參考文獻(xiàn)
第二篇 實(shí)驗(yàn)部分
    第四章 二花臉豬皮下脂肪與肌內(nèi)脂肪表達(dá)譜芯片分析
        1 實(shí)驗(yàn)方法
            1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及樣品采集
            1.2 RNA提取
            1.3 基因芯片分析
            1.4 RT-qPCR
            1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
        2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            2.1 差異表達(dá)的基因
            2.2 差異基因的GO與KEGG分析
        參考文獻(xiàn)
    第五章 “天花板”法獲取去分化的肌內(nèi)脂肪細(xì)胞
        1 實(shí)驗(yàn)方法
            1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及樣品采集
            1.2 細(xì)胞分離
            1.3 原代細(xì)胞培養(yǎng)
            1.4 細(xì)胞的傳代培養(yǎng)與凍存
            1.5 細(xì)胞增殖檢測(cè)
            1.6 RNA提取
            1.7 RT-qRCR
            1.8 油紅O染色
            1.9 去分化肌內(nèi)脂肪細(xì)胞的成脂誘導(dǎo)
            1.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
        2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            2.1 成熟肌內(nèi)脂肪細(xì)胞的獲得與自動(dòng)去分化
        2.2 后代細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線與成脂分化
            2.3 DEX、INS與IBMX對(duì)后代細(xì)胞成脂分化能力的影響
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
    第六章 miR-130a通過靶向調(diào)控PPARγ的表達(dá)來影響脂肪在皮下脂肪組織與肌內(nèi)脂肪組織中的沉積
        1 實(shí)驗(yàn)方法
            1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及樣品采集
            1.2 mRNA的提取
            1.3 RT-qPCR
            1.4 Werstern Blot
            1.5 miRNA預(yù)測(cè)
            1.6 miRNA的RT-qPCR
            1.7 質(zhì)粒構(gòu)建
            1.8 miRNA靶向性驗(yàn)證
            1.9 mimic超表達(dá)
            1.10 油紅O染色
            1.11 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
        2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            2.1 PPARγ表達(dá)量的比較
            2.2 miRNA的表達(dá)水平比較
            2.3 miRNA靶向性驗(yàn)證
            2.4 miR-130a對(duì)肌內(nèi)DFAT細(xì)胞成脂分化的影響
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
    第七章 Myostatin對(duì)肌內(nèi)DFAT細(xì)胞增殖、成脂分化能力以及對(duì)肌內(nèi)脂肪脂解作用的影響
        1 實(shí)驗(yàn)方法
            1.1 肌肉組織培養(yǎng)液的獲得
            1.2 細(xì)胞增殖檢測(cè)
            1.3 DFAT細(xì)胞的成脂誘導(dǎo)
            1.4 油紅O染色
            1.5 RT-qPCR
            1.6 脂解能力檢測(cè)
            1.7 背最長(zhǎng)肌與血清的采集
        1.8 肌內(nèi)脂肪含量的測(cè)量
            1.9 MSTN的ELISA檢測(cè)
            1.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
        2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            2.1 肌肉組織培養(yǎng)液對(duì)成脂分化的影響
            2.2 MSTN對(duì)肌內(nèi)DFAT細(xì)胞增殖的影響
            2.3 MSTN對(duì)成脂分化的影響
            2.4 MSTN對(duì)脂肪分解的影響
            2.5 MSTN mRNA表達(dá)量對(duì)肌內(nèi)脂肪含量的影響
            2.6 血清中MSTN蛋白含量對(duì)豬肌內(nèi)脂肪含量的影響
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
    第八章 SRC-2對(duì)肌內(nèi)DFAT細(xì)胞成脂分化的影響
        1 實(shí)驗(yàn)方法
            1.1 SRC-2干擾鏈的設(shè)計(jì)
            1.2 siRNA轉(zhuǎn)染條件的確定
            1.3 siRNA轉(zhuǎn)染肌內(nèi)DFAT細(xì)胞
            1.4 肌內(nèi)DFAT細(xì)胞成脂誘導(dǎo)
            1.5 油紅O染色
            1.6 mRNA提取與RT-qPCR
            1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
        2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            2.1 SRC-2在脂肪分化過程中的時(shí)序表達(dá)
            2.2 siRNA轉(zhuǎn)染條件的確定
            2.3 干擾效率的檢測(cè)
            2.4 SRC-2對(duì)肌內(nèi)DFAT細(xì)胞成脂分化的影響
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
全文結(jié)論
創(chuàng)新點(diǎn)
附錄
    附錄一 文章所用的定量引物序列
    附錄二 在皮下脂肪中高表達(dá)的基因
    附錄三 在肌內(nèi)脂肪中高表達(dá)的基因
    附錄四 試劑、儀器與溶液
致謝
攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的論文



本文編號(hào)：3198942