雞傳染性支氣管炎（Infectiousbronchitis,IB）是由雞傳染性支氣管炎病毒（Infectious bronchitis virus,IBV）引起雞的一種高度接觸性傳染病,給世界養(yǎng)禽業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。IBV基因組易發(fā)生變異和重組,從而產(chǎn)生多種血清型或變異型。臨床上用于預(yù)防IB的常規(guī)疫苗即弱毒苗和滅活苗在效果、安全和成本方面都存在缺陷,因此研制高效、安全、廉價的新型疫苗顯得非常重要。IBV結(jié)構(gòu)蛋白中S1和N蛋白是主要免疫原,分別在體液免疫和細(xì)胞免疫中發(fā)揮重要作用,因此研發(fā)包括S1和N蛋白的新型疫苗具有良好的應(yīng)用前景。昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)作為一種成熟的表達(dá)系統(tǒng),在外源蛋白的表達(dá)中具有重要的作用,該系統(tǒng)具有良好的翻譯后加工能力,可以對重組外源蛋白進(jìn)行信號肽剪切、糖基化修飾等。相關(guān)研究表明,應(yīng)用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)時引入昆蟲細(xì)胞能識別和剪切的蜂素（Honeybee melittin,HBM）信號肽能夠介導(dǎo)外源蛋白以分泌表達(dá)的形式存在于培養(yǎng)上清,同時能夠增強(qiáng)重組蛋白的表達(dá)量及糖基化修飾,表達(dá)的重組蛋白更接近天然構(gòu)象。目前桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)在IBV的應(yīng)用只是對單個蛋白進(jìn)行表達(dá),尚沒有... 

【文章來源】：廣西大學(xué)廣西壯族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：84 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮寫、符號說明
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 雞傳染性支氣管炎概述
    1.2 昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)概述
    1.3 昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)在主要家禽病毒病應(yīng)用研究進(jìn)展
        1.3.1 診斷與檢測
        1.3.2 疫苗研究方面
    1.4 本課題研究的主要內(nèi)容及其目的和意義
第二章 表達(dá)雞傳染性支氣管炎病毒GX-YL5株N蛋白的重組桿狀病毒的構(gòu)建
    2.1 材料
        2.1.1 IBV毒株
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 載體和感受態(tài)細(xì)胞
        2.1.4 主要儀器設(shè)備
    2.2 方法
        2.2.1 目的基因的獲取
        2.2.2 重組克隆載體pEasy-HBM-N的構(gòu)建及鑒定
        2.2.3 重組轉(zhuǎn)座載體pFast-HBM-N的構(gòu)建及鑒定
        2.2.4 重組桿粒rHBM-N的獲取及純化
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 目的基因擴(kuò)增
        2.3.2 HBM-N基因的克隆載體的構(gòu)建及鑒定
        2.3.3 重組轉(zhuǎn)座載體pFast-HBM-N的構(gòu)建及鑒定
        2.3.4 重組桿粒rHBM-N的獲取及純化
    2.4 小結(jié)與討論
第三章 表達(dá)雞傳染性支氣管炎病毒GX-YL5株S蛋白的重組桿狀病毒的構(gòu)建
    3.1 材料
        3.1.1 病毒及相關(guān)反應(yīng)試劑
        3.1.2 引物設(shè)計與合成
    3.2 方法
        3.2.1 S1、S基因及融合HBM信號肽HBM-S1、HBM-S的擴(kuò)增
        3.2.2 S1、S基因克隆載體的構(gòu)建及鑒定
        3.2.3 S1、S基因轉(zhuǎn)座載體的構(gòu)建及鑒定
        3.2.4 重組桿粒rHBM-S1、r-S1、rHBM-S和r-S的鑒定及純化
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 目的基因擴(kuò)增
        3.3.2 克隆載體的構(gòu)建及鑒定
        3.3.3 重組轉(zhuǎn)座載體的構(gòu)建及鑒定
        3.3.4 重組桿粒的獲取及純化
    3.4 小結(jié)與討論
        3.4.1 S和S1蛋白的重轉(zhuǎn)座載體的構(gòu)建及鑒定
        3.4.2 表達(dá)S和S1蛋白的重組桿粒的獲取及純化
第四章 共表達(dá)雞傳染性支氣管炎病毒GX-YL5株N蛋白和S1蛋白的重組桿狀病毒的構(gòu)建
    4.1 材料
        4.1.1 載體
        4.1.2 相關(guān)分子生物學(xué)試劑
    4.2 方法
        4.2.1 雙元轉(zhuǎn)座載體pFast-HBM-S1-N的構(gòu)建及鑒定
        4.2.2 雙表達(dá)桿粒rHBM-S-N的獲取及純化
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 重組轉(zhuǎn)座載體pFast-HBM-S-N鑒定
        4.3.2 重組桿粒rHBM-S-N鑒定及純化
    4.4 小結(jié)與討論
第五章 結(jié)論
    5.1 構(gòu)建了攜帶蜂素信號肽的IBV GX-YL5株N蛋白的重組桿狀病毒
    5.2 構(gòu)建了攜帶蜂素信號肽的IBV GX-YL5株S蛋白的重組桿狀病毒
    5.3 構(gòu)建了攜帶蜂素信號肽的共表達(dá)IBV GX-YL5株S1和N蛋白的重組桿狀病毒
創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
附錄一
附錄二
致謝
個人簡歷
攻讀碩士學(xué)位期間論文發(fā)表情況及參與的科研項目



本文編號：3195262