豬圓環(huán)病毒3型（porcine circovirus 3,PCV-3）是近些年發(fā)現(xiàn)的一種新型豬圓環(huán)病毒,在臨床上能引起豬的多種疾病,給世界養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重危害和巨大損失。現(xiàn)今,世界各國對PCV-3的研究尚處于起步階段,檢測方法還局限在分子生物學(xué)水平,尚無大規(guī)模診斷和預(yù)防PCV-3的方法,導(dǎo)致了商品化ELISA檢測試劑盒和疫苗的缺口,因此各國研究學(xué)者正加緊針對PCV-3的進(jìn)一步研究。目前報道表明,PCV-3 ORF2序列編碼的重要結(jié)構(gòu)蛋白Cap具有良好的免疫原性,能夠誘導(dǎo)免疫反應(yīng),用其作為抗原研制ELISA檢測試劑盒,有利于區(qū)分在臨床癥狀上相似的PCV-3、PCV-2、PNDS等疾病,方便對規(guī)�；i場進(jìn)行PCV-3的大量檢測和流行病學(xué)調(diào)查。為高效表達(dá)PCV-3 Cap蛋白,本研究以PCV-3 ORF2序列為模板,先對其序列上的稀有密碼子進(jìn)行簡單優(yōu)化（上海生工）,針對優(yōu)化后序列設(shè)計引物,擴(kuò)增出625bp大小的目的片段,與帶有His標(biāo)簽的pET-28a載體質(zhì)粒分別進(jìn)行酶切后連接成為重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化到大腸桿菌表達(dá)菌株中,挑取陽性菌落,經(jīng)酶切鑒定和測序驗證后誘導(dǎo)表達(dá),經(jīng)SDS-Page和Wester... 

【文章來源】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
英文縮略詞表
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 豬圓環(huán)病毒概述
        1.1.1 豬圓環(huán)病毒(Porcine circovirus, PCV)
        1.1.2 豬圓環(huán)病毒病(Porcine circovirus disease, PCVD)
    1.2 研究背景
        1.2.1 歷史背景
        1.2.2 研究現(xiàn)狀
    1.3 豬圓環(huán)病毒3型的病原學(xué)
        1.3.1 形態(tài)特征及理化學(xué)特性
        1.3.2 基因組結(jié)構(gòu)與功能
        1.3.3 培養(yǎng)特性
    1.4 豬圓環(huán)病毒3型的流行病學(xué)
    1.5 豬圓環(huán)病毒3型的病理特征
        1.5.1 臨床癥狀
        1.5.2 病理變化
    1.6 豬圓環(huán)病毒3型的診斷方法
        1.6.1 病毒的分離與鑒定
        1.6.2 分子生物學(xué)檢測方法
    1.7 豬圓環(huán)病毒3型的防治措施
    1.8 本研究的目的與意義
第二章 PCV-3 Cap蛋白的原核表達(dá)及純化
    2.1 材料
        2.1.1 豬圓環(huán)病毒3型的陽性病料
        2.1.2 所用載體和菌株
        2.1.3 主要的藥品、試劑及其生產(chǎn)廠家
        2.1.4 試劑配方
        2.1.5 實驗儀器
    2.2 方法
        2.2.1 序列突變和引物的設(shè)計
        2.2.2 目的基因的擴(kuò)增
        2.2.4 PCR產(chǎn)物的鑒定、回收和雙酶切
        2.2.5 原核表達(dá)載體的獲取和雙酶切
        2.2.6 目的片段和載體質(zhì)粒的連接
        2.2.7 轉(zhuǎn)化
        2.2.8 重組蛋白的表達(dá)和鑒定
        2.2.9 重組蛋白的純化
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 序列突變和引物的設(shè)計
        2.3.2 PCR擴(kuò)增結(jié)果
        2.3.3 重組質(zhì)粒酶切鑒定和PCR鑒定
        2.3.4 重組表達(dá)質(zhì)粒菌液PCR鑒定結(jié)果
        2.3.5 PCV-3 ORF2生工測序結(jié)果
        2.3.6 重組蛋白表達(dá)后鑒定
        2.3.7 包涵體蛋白的判斷和處理
        2.3.8 重組蛋白的純化
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三章 多克隆抗體的制備
    3.1 材料
        3.1.1 實驗動物和實驗所需抗原
        3.1.2 主要藥品、試劑及其生產(chǎn)廠家
        3.1.3 試劑配方
        3.1.4 主要儀器
    3.2 方法
        3.2.1 蛋白的復(fù)性
        3.2.2 膠體金免疫印記實驗
        3.2.3 病毒粒子觀察-負(fù)染電鏡觀察(TEM)
        3.2.4 抗原的制備
        3.2.5 動物免疫
        3.2.6 血清收集
        3.2.7 抗體鑒定
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 膠體金免疫印記實驗
        3.3.2 負(fù)染電鏡觀察
        3.3.3 Western Blot鑒定
        3.3.4 ELISA檢測
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝



本文編號：3194967