副豬嗜血桿菌（Haemophilus parasuis, HPS）是常規(guī)飼養(yǎng)豬群上呼吸道中寄生的一種常在菌,但在動物體應激、免疫力低下等情況下某些分離株可侵入機體并引發(fā)嚴重的全身性疾病,臨床特征主要表現(xiàn)為纖維素性多發(fā)性漿膜炎、關(guān)節(jié)炎和腦膜炎等。近年來鑒于養(yǎng)殖場飼養(yǎng)模式的不斷調(diào)整以及新型呼吸道疾病的層出不窮,副豬嗜血桿菌病日趨流行,對世界養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大危害。近年來基因工程產(chǎn)業(yè)發(fā)展迅猛,使得疫苗的研發(fā)無論在方法上還是在觀念上都發(fā)生了重大轉(zhuǎn)變。當前應用基因重組技術(shù)構(gòu)建沙門氏菌減毒菌株和利用減毒沙門氏菌作為活載體表達外源抗原研制多聯(lián)疫苗等已成為研究熱點之一。本課題是基于豬霍亂沙門氏菌C500菌株Aasd缺失株平衡致死載體系統(tǒng)進行副豬嗜血桿菌-豬霍亂沙門氏菌二聯(lián)基因工程疫苗研發(fā)。基本思路是利用仔豬副傷寒商品疫苗菌株豬霍亂沙門氏菌C500作為宿主菌株,插入已經(jīng)蛋白質(zhì)組學方法篩選鑒定的副豬嗜血桿菌重要免疫原性基因hps06257、HbpB及PalA,從而獲得副豬嗜血桿菌-豬霍亂沙門氏菌二聯(lián)基因工程疫苗菌株C501（06257）、C501（HbpB）、 C501（PalA）,并對這些重組菌株進行生物... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
目錄
摘要
ABSTRACT
縮略語表
1 文獻綜述
    1.1 副豬嗜血桿菌研究進展
        1.1.1 病原學與發(fā)病機理
        1.1.2 流行病學
        1.1.3 臨床癥狀和病理變化
        1.1.4 診斷
        1.1.5 防制
    1.2 減毒沙門氏菌活疫苗載體系統(tǒng)研究進展
        1.2.1 減毒策略
        1.2.2 免疫機理
        1.2.3 減毒沙門氏菌活疫苗載體系統(tǒng)的優(yōu)勢與局限
        1.2.4 減毒沙門氏菌活疫苗載體系統(tǒng)的臨床應用
        1.2.5 沙門氏菌載體活疫苗與腸道粘膜免疫
2 前言
3 材料與方法
    3.1 細菌、質(zhì)粒及試驗動物
    3.2 主要試劑、培養(yǎng)基及緩沖液
        3.2.1 試驗試劑
        3.2.2 常用培養(yǎng)基的配制
        3.2.3 常用溶液的配制
        3.2.4 主要試驗器材
    3.3 試驗方法
        3.3.1 副豬嗜血桿菌-豬霍亂沙門氏菌二聯(lián)基因工程疫苗菌株構(gòu)建
        3.3.2 二聯(lián)基因工程疫苗菌株生物學特性鑒定
        3.3.3 疫苗菌株C501(06257)、C501(HbpB)、C500(PalA)安全性評價
        3.3.4 副豬嗜血桿菌-豬霍亂沙門氏菌二聯(lián)基因工程疫苗制備
        3.3.5 二聯(lián)重組基因工程疫苗小鼠免疫試驗
        3.3.6 免疫小鼠體內(nèi)疫苗菌株的定植檢測
        3.3.7 二聯(lián)重組基因工程疫苗對免疫小鼠的攻毒保護性試驗
4 結(jié)果與分析
    4.1 二聯(lián)基因工程疫苗重組菌株構(gòu)建
        4.1.1 目的基因分析與克隆
        4.1.2 表達質(zhì)粒pYA-06257、pYA-HbpB和pYA-PalA酶切鑒定
        4.1.3 重組菌株C501(06257)、C501(HbpB)及C500(PalA)鑒定
    4.2 重組菌株生物學特性鑒定研究
        4.2.1 重組菌株C501(06257)、C501(HbpB)及C500(PalA)表達特性
        4.2.2 重組疫苗菌株遺傳穩(wěn)定性研究
        4.2.3 重組菌C501(06257)、C501(HbpB)及C500(PalA)生長特性研究
        4.2.4 重組菌株生化特性鑒定
        4.2.5 重組菌株對小鼠的LD_(50)測定
    4.3 重組菌株對易感仔豬的安全性評估
    4.4 重組蛋白HPS06257、HbpB及PalA的SDS-PAGE分析
    4.5 免疫小鼠特異性抗體檢測
        4.5.1 HPS06257特異性抗體水平檢測及其亞類分析
        4.5.2 HbpB特異性抗體水平檢測及其亞類分析
        4.5.3 PalA特異性抗體水平檢測及其亞類分析
        4.5.4 沙門氏菌抗原特異性IgG水平檢測
        4.5.5 免疫小鼠體內(nèi)IgA水平檢測
    4.6 免疫小鼠組織載菌分布檢測
    4.7 免疫小鼠攻毒試驗
        4.7.1 免疫小鼠對副豬嗜血桿菌SH0165菌株的攻毒保護試驗
        4.7.2 免疫小鼠對豬霍亂沙門氏菌C78-1菌株的攻毒保護試驗
5 討論
    5.1 豬霍亂沙門氏菌及其作為疫苗載體的應用前景
    5.2 關(guān)于副豬嗜血桿菌病防控的一些探討
    5.3 副豬嗜血桿菌-豬霍亂沙門氏菌疫苗研究的結(jié)果與反思
6 小結(jié)
    6.1 主要結(jié)論
    6.2 值得進一步探討的問題
附錄
參考文獻
致謝



本文編號：3194942