布魯氏菌病是一種人畜共患的慢性傳染病，動(dòng)物感染該病后的表現(xiàn)為母畜的流產(chǎn)和公畜的睪丸炎，對(duì)人而言，感染該病后可引起人的波浪熱，關(guān)節(jié)炎以及肌肉疼痛等。布魯氏菌（Brucella）作為布魯氏菌病的病原菌，其在宿主內(nèi)的生存機(jī)制一直都是研究的熱點(diǎn)。布魯氏菌本身不產(chǎn)生內(nèi)毒素，其逃避宿主的免疫系統(tǒng)的殺傷作用主要是通過各種毒力因子實(shí)現(xiàn)的，外膜蛋白就是布魯氏菌的重要毒力因子之一，因此本文從布魯氏菌的外膜蛋白基因omp25基因入手，通過以下三個(gè)實(shí)驗(yàn)在細(xì)胞水平和個(gè)體水平上探討布魯氏菌在侵襲宿主時(shí)，omp25基因缺失株的毒力和對(duì)細(xì)胞自噬的影響。1根據(jù)GenBank中發(fā)表的布魯氏菌外膜蛋白基因omp25的基因序列，設(shè)計(jì)一對(duì)引物，通過PCR方法擴(kuò)增omp25基因的DNA片段，將擴(kuò)增片段克隆至T載體中，構(gòu)建克隆載體pMD-T-omp25，經(jīng)PCR篩選出陽(yáng)性克隆菌并測(cè)序鑒定，分別將pET28a-GFP質(zhì)粒和測(cè)序成功的pMD-T-omp25質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶EcoRⅠ、SalⅠ雙酶切，并將回收的omp25基因片段、pET28a-GFP片段進(jìn)行連接，構(gòu)建原核表達(dá)載體pET28a-GFP-omp25，將表達(dá)載體轉(zhuǎn)化至表達(dá)菌... 

【文章來源】：石河子大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū) 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：86 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
英文縮略詞表
引言
第一章 文獻(xiàn)綜述 布魯氏菌與自噬研究進(jìn)展
    1 布魯氏菌基本特征
        1.1 布魯氏菌的分類與特點(diǎn)
        1.2 人布魯氏菌病
        1.3 牛布魯氏菌病
        1.4 非調(diào)理布魯氏菌在細(xì)胞內(nèi)的生存方式
        1.5 調(diào)理布魯氏菌在細(xì)胞內(nèi)的生存方式
        1.6 布魯氏菌的毒力、胞內(nèi)生存和復(fù)制
    2 布魯氏菌外膜蛋白研究進(jìn)展
        2.1 外膜蛋白概述
        2.2 第一組外膜蛋白
        2.3 第二組外膜蛋白
        2.4 第三組外膜蛋白
    3 布魯氏菌與自噬研究進(jìn)展
        3.1 自噬概述
        3.2 自噬的激活
        3.3 自噬與疾病
        3.4 自噬的監(jiān)測(cè)方法
        3.5 布魯氏菌與自噬
第二章 實(shí)驗(yàn)研究
    實(shí)驗(yàn)一 布魯氏菌omp25基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建與表達(dá)
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 omp25基因PCR擴(kuò)增結(jié)果
            2.2 測(cè)序結(jié)果
            2.3 重組表達(dá)質(zhì)粒pET28a-GFP-omp25的酶切鑒定結(jié)果
            2.4 OMP25蛋白的表達(dá)和純化結(jié)果
        3 討論
    實(shí)驗(yàn)二 布魯氏菌S2308Δomp25基因缺失株的構(gòu)建及其穩(wěn)定性檢測(cè)
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 擴(kuò)增omp25基因上、下游同源臂
            2.2 omp25基因上、下游同源臂融合PCR
            2.3 SacB基因的擴(kuò)增
            2.4 酶切鑒定重組質(zhì)粒（T載體）pMD19-omp2534
            2.5 酶切鑒定重組質(zhì)粒（自殺載體）pGEM-7zf+-omp25-SacB
            2.6 布魯氏菌omp25基因缺失株同源重組單雙交換子的篩選
            2.7 2308Δomp25基因缺失株的遺傳穩(wěn)定性檢測(cè)
            2.8 2308Δomp25基因缺失株毒力的初步評(píng)價(jià)
        3 討論
            3.1 基因敲除技術(shù)
            3.2 電轉(zhuǎn)化效率
            3.3 omp25基因缺失株毒力
    實(shí)驗(yàn)三 布魯氏菌omp25基因缺失株對(duì)胚胎滋養(yǎng)層細(xì)胞的自噬作用
        摘要
        1 材料方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 激光共聚焦
            2.2 RNA提取
            2.3 實(shí)時(shí)定量檢測(cè)
        3 討論
            3.1 鏡檢樣本制作的分析
            3.2 缺失株對(duì)細(xì)胞自噬的作用
結(jié)論
創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介
附件


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Gene expression changes in spleens of the wildlife reservoir species,Eurasian wild boar（Sus scrofa）,naturally infected with Brucella suis biovar 2[J]. Ruth C.Galindo,Pilar M.Muoz,María J.de Miguel,Clara M.Marin,Javier Labairu,Miguel Revilla,José M.Blasco,Christian Gortazar,José de la Fuente.  遺傳學(xué)報(bào). 2010(11)
[2]布魯氏菌病對(duì)人的危害[J]. 應(yīng)洪艷,寧秀云,劉海英,喬新宇,韓華.  畜牧獸醫(yī)科技信息. 2009(01)
[3]衛(wèi)生部、農(nóng)業(yè)部關(guān)于加強(qiáng)布魯氏菌病防治工作的通知[J].   中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部公報(bào). 2008(01)
[4]布魯氏菌病研究進(jìn)展[J]. 毛開榮.  動(dòng)物保健. 2006(09)
[5]新疆綿羊種布魯氏菌OMP25基因的分子克隆及核苷酸序列的測(cè)定[J]. 柳建新,陳創(chuàng)夫,田晶華.  中國(guó)獸醫(yī)雜志. 2005(11)
[6]綠色熒光蛋白（GFP）在分子遺傳學(xué)上的研究進(jìn)展[J]. 楊秀芹,劉娣,祖延濤.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2001(07)
[7]章丘市布魯氏菌病疫點(diǎn)的調(diào)查及處理[J]. 梁普偉,張維棟,劉殿禮,鄭應(yīng)良,景慎文,張衛(wèi).  中國(guó)地方病防治雜志. 2000(03)



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