為了建立一種快速定量檢測豬偽狂犬病病毒（PRV）gB蛋白抗體的競爭化學發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測方法,以大腸桿菌表達并純化的豬偽狂犬病病毒gB重組蛋白作為包被抗原,以辣根過氧化物酶標記的抗gB蛋白單克隆抗體作為酶標抗體,以國家參考品稀釋制備的校準品繪制標準曲線實現(xiàn)定量檢測,成功建立的PRV-gB-CLEIA在45 min內(nèi)即可完成檢測,可檢測到最大稀釋倍數(shù)為1∶2 048稀釋的國家參考品;與豬瘟等其他5種病毒抗原的標準陽性血清無交叉反應;批內(nèi)變異系數(shù)為1.13%～9.47%,批間變異系數(shù)為2.43%～14.07%,重復性和穩(wěn)定性較好。通過對采集的180份臨床血清檢測結(jié)果進行比較,該方法與中和試驗陽性符合率為94.00%,陰性符合率為96.92%,總符合率為96.11%,明顯優(yōu)于商品化ELISA試劑盒。本研究建立的PRV-gB-CLEIA檢測方法可以用于PRV gB抗體的快速定量檢測。 

【文章來源】：畜牧獸醫(yī)學報. 2020,51(03)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：10 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 病毒、細菌、細胞、血清及實驗動物
    1.2 主要儀器和試劑
    1.3 抗PRV gB蛋白單克隆抗體的制備
    1.4 抗PRV gB蛋白單克隆抗體的鑒定
        1.4.1 Western blot分析
        1.4.2 特異性鑒定
        1.4.3 應用性鑒定
    1.5 PRV gB蛋白抗體競爭化學發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測方法(CLEIA)的建立
        1.5.1 最佳濃度的確定
        1.5.2 最佳緩沖液的確定
        1.5.3 最佳反應時間的確定
        1.5.4 校準品的制備
        1.5.5 臨界值的確定
        1.5.6 特異性試驗
        1.5.7 敏感性試驗
        1.5.8 重復性試驗
        1.5.9 保存期研究
        1.5.10 比對試驗
2 結(jié) 果
    2.1 抗PRV gB蛋白單克隆抗體的制備
    2.2 單抗的特異性鑒定
    2.3 單抗的應用性鑒定
    2.4 PRV gB蛋白抗體競爭化學發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測方法(CLEIA)的建立
        2.4.1 最佳濃度的確定
        2.4.2 最佳緩沖液的確定
        2.4.3 最佳反應時間的確定
        2.4.4 校準品的制備
        2.4.5 臨界值的確定
        2.4.6 特異性試驗
        2.4.7 敏感性試驗
        2.4.8 重復性試驗
        2.4.9 保存期研究
        2.4.10 比對試驗
3 討 論
4 結(jié) 論



本文編號：3192677