本試驗(yàn)?zāi)康氖茄芯緼dipoQ、AdipoRl和AdipoR2對(duì)山羊脂肪沉積的作用機(jī)制,為后續(xù)通過AdipoQ來調(diào)控山羊肌肉中的脂肪酸合成,改善山羊肉品質(zhì)提供依據(jù)。試驗(yàn)克隆得到南江黃羊AdipoQ、AdipoRl和AdipoR2基因的全長編碼區(qū)序列。利用半定量RT-PCR檢測(cè)3個(gè)基因在山羊11個(gè)組織（皮下脂肪、背最長肌、股二頭肌、腓腸肌、卵巢、子宮、腦、瘤胃、腎臟、肝臟和心臟）中的表達(dá)模式。利用qPCR檢測(cè)AdipoQ、AdipoRl和AdipoR2基因在南江黃羊出生后5個(gè)發(fā)育階段（3 d、30 d、60 d、90 d和120 d）背最長肌中mRNA的相對(duì)表達(dá)量。利用含高濃度葡萄糖的培養(yǎng)基（25 mM/L）誘導(dǎo)山羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞（Skeletal muscle satellite cells, SMSCs）向脂肪細(xì)胞分化,油紅O染色檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)脂肪滴的沉積,qPCR檢測(cè)AdipoQ、 AdipoR1、AdipoR2、脂肪酸合成及成脂分化相關(guān)基因的相對(duì)表達(dá)量。構(gòu)建AdipoQ基因過表達(dá)載體pEGFP-N1-AD,并在山羊SMSCs中過表達(dá)AdipoQ基因。熒光顯微鏡檢測(cè)融合蛋白的亞細(xì)胞定位,... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 AdipoQ及AdipoR1/2的研究進(jìn)展
        1.1.1 AdipoQ的結(jié)構(gòu)與分布
        1.1.2 AdipoR1/2的結(jié)構(gòu)與分布
        1.1.3 AdipoQ及AdipoR1/2的生物學(xué)功能
            1.1.3.1 AdipoQ在骨骼肌中的功能
            1.1.3.2 AdipoQ在肝臟中的功能
            1.1.3.3 AdipoQ在心血管中的功能
            1.1.3.4 AdipoQ在肺中的功能
            1.1.3.5 AdipoQ與癌癥的關(guān)系
        1.1.4 AdipoQ及AdipoR1/2的調(diào)控
            1.1.4.1 AdipoQ的表達(dá)分泌調(diào)節(jié)
            1.1.4.2 AdipoR1/2的表達(dá)分泌調(diào)節(jié)
    1.2 SMSCs簡(jiǎn)介
    1.3 本研究的目的與意義
2 材料與方法
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 試驗(yàn)組織樣品
        2.1.2 山羊SMSCs
    2.2 儀器與試劑
        2.2.1 主要儀器
        2.2.2 主要試劑
    2.3 試驗(yàn)方法
        2.3.1 總RNA的提取
        2.3.2 總RNA的質(zhì)量檢測(cè)
        2.3.3 cDNA的合成
        2.3.4 AdipoQ、AdipoR1和AdipoR2基因的克隆
            2.3.4.1 引物設(shè)計(jì)
            2.3.4.2 RT-PCR擴(kuò)增
            2.3.4.3 PCR產(chǎn)物膠回收
            2.3.4.4 目的基因的克隆
            2.3.4.5 目的基因的鑒定及測(cè)序
            2.3.4.6 生物信息學(xué)分析
        2.3.5 AdipoQ、AdipoR1和AdipoR2基因的表達(dá)分析
            2.3.5.1 目的基因定量引物設(shè)計(jì)
            2.3.5.2 半定量RT-PCR檢測(cè)目的基因的組織表達(dá)模式
            2.3.5.3 qPCR檢測(cè)目的基因在不同發(fā)育階段背最長肌中的表達(dá)
        2.3.6 山羊SMSCs的成脂分化
            2.3.6.1 山羊SMSCs的培養(yǎng)及高糖誘導(dǎo)分化
            2.3.6.2 山羊SMSCs內(nèi)脂肪滴的油紅O染色
            2.3.6.3 脂肪酸合成及成脂分化相關(guān)基因引物設(shè)計(jì)
            2.3.6.4 qPCR檢測(cè)脂肪酸合成及成脂分化相關(guān)基因表達(dá)
            2.3.6.5 脂肪酸合成及成脂分化基因的表達(dá)相關(guān)性分析
        2.3.7 AdipoQ基因在山羊SMSCs中的過表達(dá)
            2.3.7.1 載體構(gòu)建
            2.3.7.2 質(zhì)粒提取
            2.3.7.3 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染
            2.3.7.4 qPCR檢測(cè)相關(guān)基因的表達(dá)
    2.4 統(tǒng)計(jì)分析
3 試驗(yàn)結(jié)果與分析
    3.1 AdipoQ、AdipoR1和AdipoR2的克隆及序列分析
        3.1.1 RNA質(zhì)量的檢測(cè)
        3.1.2 目的基因的克隆結(jié)果
        3.1.3 測(cè)序及生物信息學(xué)分析結(jié)果
        3.1.4 AdipoQ、AdipoR1和AdipoR2蛋白結(jié)構(gòu)
    3.2 AdipoQ、AdipoR1和AdipoR2的組織表達(dá)
    3.3 AdipoQ、AdipoR1和AdipoR2在背最長肌中的表達(dá)
    3.4 山羊SMSCs的誘導(dǎo)分化
        3.4.1 細(xì)胞中的脂肪滴沉積
        3.4.2 脂肪酸合成及成脂分化相關(guān)基因的表達(dá)
        3.4.3 分化過程中基因表達(dá)的相關(guān)性
    3.5 AdipoQ基因的過表達(dá)
        3.5.1 AdipoQ的載體構(gòu)建
        3.5.2 AdipoQ的亞細(xì)胞定位
        3.5.3 AdipoQ對(duì)相關(guān)基因的調(diào)控
4 討論
    4.1 基因的克隆及生物信息學(xué)分析
    4.2 基因的組織表達(dá)規(guī)律
    4.3 基因在背最長肌中的表達(dá)
    4.4 山羊SMSCs的成脂分化
    4.5 AdipoQ在SMSCs中的過表達(dá)
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]山羊SREBP-1基因的超表達(dá)對(duì)脂肪酸代謝相關(guān)基因表達(dá)的影響[J]. 許會(huì)芬,羅軍,李芳,余康,石恒波,李君,林先滋,朱江江.  生物工程學(xué)報(bào). 2012(11)

碩士論文
[1]豬脂聯(lián)素和脂聯(lián)素受體基因的mRNA表達(dá)對(duì)肌內(nèi)脂肪含量和背膘厚的影響[D]. 陳其美.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009



本文編號(hào)：3192254