發(fā)布時(shí)間：2021-05-17 09:19

　　生長激素受體（growth hormone receptor, GHR）在動(dòng)物生長發(fā)育過程中具有重要作用。為研究GHR基因相關(guān)長鏈非編碼RNAs （long noncoding RNAs, lncRNAs）在從江香豬（Sus scrofa）不同組織中的表達(dá)規(guī)律,本研究以貴州從江香豬和大白豬為研究對象,以生長發(fā)育相關(guān)的miR-146b-3p為關(guān)聯(lián)點(diǎn),通過SWChen 2.3程序篩選GHR相關(guān)lncRNAs,對篩選出來的lncRNAs進(jìn)行克隆驗(yàn)證。以候選lncRNA NONSUST017828.1 （GenBank No. TCONS₀0020564,命名為lncGHR1）為研究對象,對其進(jìn)行生物信息學(xué)及組織表達(dá)譜分析,并構(gòu)建lncGHR1-CMV超表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染至人源胚胎腎細(xì)胞（human embryonic kidney cells, HEK-293T）和從江香豬原代肌細(xì)胞,檢測細(xì)胞增殖相關(guān)基因YAP （Yes-associated protein）和TAZ（transcription activator）的表達(dá)情況。結(jié)果顯示,lncGHR1二級結(jié)構(gòu)最小自由能為-... 

【文章來源】：農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2020,28(12)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：11 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及樣品采集
        1.1.2 主要試劑與儀器
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.2.1 篩選與GHR基因相關(guān)lnc RNAs
        1.2.2 lnc GHR1生物信息學(xué)分析
        1.2.3 PCR引物設(shè)計(jì)與合成
        1.2.4 總RNA提取與c DNA合成
        1.2.5 目的片段擴(kuò)增
        1.2.6 T克隆載體和超表達(dá)載體構(gòu)建
        1.2.7 qRT-PCR
        1.2.8 統(tǒng)計(jì)分析
2 結(jié)果與分析
    2.1 篩選lnc RNAs
    2.2 lnc GHR1與mi RNAs的結(jié)合情況
    2.3 lnc GHR1的二級結(jié)構(gòu)及開放閱讀框預(yù)測
    2.4 lnc GHR1與不同物種GHR 3'UTR的序列比較
    2.5 克隆載體和重組載體的構(gòu)建與鑒定
    2.6 lnc GHR1在從江香豬及大白豬中各組織的表達(dá)情況
    2.7 轉(zhuǎn)染重組載體至HEK-293T和從江香豬原代肌細(xì)胞
3 討論
4 結(jié)論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬PRKAA1基因相關(guān)LncRNAs的篩選及其在組織中的表達(dá)分析[J]. 吳小敏,倪鍇,朱曉鋒,諶穎蓮,趙佳福,許厚強(qiáng).  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2020(02)
[2]從江香豬和大白豬不同組織/器官中GHR、JAK2、STAT3基因的表達(dá)分析[J]. 張鳴,許厚強(qiáng),陳偉,王圓圓,楊洋,楊濤.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2018(21)
[3]GHR基因敲除香豬的鑒定及生長指標(biāo)測定[J]. 陳偉,許厚強(qiáng),喻昌毅,陳明飛,肖偉,張鳴,楊洋.  基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2016(12)
[4]反義長鏈非編碼RNA與基因表達(dá)調(diào)控[J]. 蔣孝明,邵永富,肖丙秀,郭俊明.  生物物理學(xué)報(bào). 2013(07)

博士論文
[1]MicroRNA-146b-3p通過靶向NF2促進(jìn)甲狀腺乳頭狀癌轉(zhuǎn)移的研究[D]. 張莉.山東大學(xué) 2019



本文編號：3191514