羊口瘡又稱羊傳染性膿皰皮炎�。╟ontagious ecthyma,CE）,它是由副痘病毒屬成員羊口瘡病毒（Orf virus,ORFV）感染引起的一種人畜共患病。人、綿羊和山羊可通過接觸感染發(fā)生的急性傳染性皮膚病,這種皮膚性痘病毒已經(jīng)發(fā)展出一系列機制,逃避人和動物的宿主免疫系統(tǒng)的監(jiān)控。研究發(fā)現(xiàn)ORFV ORF019、ORFV ORF020基因分別編碼的蛋白與VACV（vaccinia virus）的E2L和E3L蛋白為直系同源物,其中E3L蛋白通過隔離dsRNA來抑制INF系統(tǒng),而E2L存在于感染細胞的成熟病毒粒子中,對病毒粒子的轉(zhuǎn)運起著至關(guān)重要的作用。但目前對ORFV ORF019和ORF020基因分別編碼的E2L和E3L蛋白的功能研究較少。因此,通過對ORFV的ORF019和ORF020基因編碼蛋白的表達研究可為羊口瘡的免疫診斷和免疫預(yù)防提供科學依據(jù)。1.ORFV ORF019和ORF020克隆及同源性分析參考GenBank中登錄的ORFV OV-SA00株的基因組序列（登錄號:AY386264）,根據(jù)ORF019和ORF020基因序列,運用Oligo6.0生物信息學軟件分別設(shè)計... 

【文章來源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學甘肅省

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Summary
外文縮略詞表
第一部分 文獻綜述
    第一章 羊口瘡研究進展
        1 羊口瘡的流行病學與臨床癥狀
        2 病原學特征
        3 ORFV的基因組學
        4 ORFV的致病機理
        5 ORFV的免疫逃避機制
        6 ORFV的檢測與診斷方法
            6.1 電子顯微鏡觀察
            6.2 組織病理學診斷
            6.3 病毒分離培養(yǎng)
            6.4 ELISA檢測
            6.5 補體結(jié)合試驗診斷
            6.6 免疫印跡方法診斷
            6.7 常規(guī)PCR檢測
            6.8 Real-tine PCR檢測
            6.9 環(huán)介導等溫擴增技術(shù)
        7 羊口瘡疫苗研究
        8 羊口瘡的防治
        9 本研究的目的意義
第二部分 試驗研究
    第二章 ORFV ORF019和ORF020 基因的克隆及同源性分析
        1 材料
            1.1 毒株、細胞和載體
            1.2 試劑
            1.3 儀器
        2 方法
            2.1 OT細胞的傳代培養(yǎng)
            2.2 ORFV的傳代培養(yǎng)
            2.3 ORFV ORF019和ORF020 基因克隆
            2.4 PCR擴增
            2.5 瓊脂糖凝膠電泳
            2.6 PCR產(chǎn)物回收、純化
            2.7 目的片段與表達載體pET32a(+)的連接
            2.8 連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化
            2.9 重組質(zhì)粒的鑒定
            2.10 同源性分析
        3 結(jié)果
            3.1 ORFV/QH02/2010株ORF019和ORF020 基因PCR擴增結(jié)果
            3.2 ORFV/QH02/2010株ORF019和ORF020 基因重組質(zhì)粒的鑒定
            3.3 同源性分析結(jié)果
        4 討論
    第三章 ORFV E2L和 E3L蛋白的表達及E2L蛋白多克隆抗體的制備
        1 材料
            1.1 菌株與重組質(zhì)粒
            1.2 實驗動物
            1.3 試劑
            1.4 儀器
            1.5 主要試劑的配制
        2 方法
            2.1 重組質(zhì)粒表達菌的轉(zhuǎn)化
            2.2 重組菌的誘導表達
            2.3 誘導溫度的優(yōu)化
            2.4 目的蛋白的大量表達
            2.5 目的蛋白的純化
            2.6 Western-blot檢測
            2.7 免疫原的制備
            2.8 E2L多克隆抗體的制備
            2.9 E2L多克隆抗體效價的測定
        3 結(jié)果
            3.1 重組蛋白的表達與鑒定
            3.2 重組蛋白表達的適宜溫度選擇
            3.3 融合蛋白的可溶性分析
            3.4 重組蛋白的純化
            3.5 重組蛋白的Western-blot分析
            3.6 ELISA法檢測兔抗His-E2L多克隆抗體效價
            3.7 兔抗His-E2L多克隆抗體特異性鑒定
        4 討論
    第四章 全文結(jié)論
參考文獻
致謝
作者簡介
導師簡介



本文編號：3186511