J亞群禽白血病病毒（Avian leukosis virus subgroup J,ALV-J）是一種典型的致瘤性逆轉(zhuǎn)錄病毒,該病毒基因組主要編碼三個(gè)基因,即病毒衣殼蛋白（gag）、聚合酶（pol）和囊膜蛋白（env）。ALV-J侵染宿主細(xì)胞時(shí),首先吸附到細(xì)胞特異性受體進(jìn)入細(xì)胞漿,ALV-J自身所攜帶的反轉(zhuǎn)錄酶介導(dǎo)病毒從基因組RNA逆轉(zhuǎn)錄成前體病毒DNA,然后整合到宿主細(xì)胞基因組中利用宿主RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄生成新病毒RNA,并進(jìn)一步翻譯生成病毒的各種前體蛋白和以及裝配病毒粒子的成熟蛋白質(zhì),最后通過出芽的方式釋放到胞外。ALV-J從吸附到脫殼（出芽）需要經(jīng)歷了復(fù)雜的生理過程;同時(shí),ALV-J和其他病毒一樣,基因組結(jié)構(gòu)比較簡單,缺乏自身復(fù)制所需的完整酶系統(tǒng),所以ALV-J在復(fù)制過程中需要劫持對(duì)自身有利的宿主蛋白,利用宿主蛋白的相關(guān)功能和特性來完成自身復(fù)制,但是,參與ALV-J復(fù)制的相關(guān)宿主蛋白至今鮮有報(bào)道。為了明確對(duì)ALV-J復(fù)制起關(guān)鍵作用的宿主蛋白,本研究通過蛋白質(zhì)組學(xué)（Tandem mass tag,TMT）方法來篩選相關(guān)差異表達(dá)蛋白。首先對(duì)ALV-J感染的DF-1細(xì)胞和正常DF-1細(xì)胞... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
符號(hào)說明
中文摘要
Abstract
1.前言
    1.1 禽白血病病毒概述
        1.1.1 ALV分類
        1.1.2 ALV-J病毒基因組結(jié)構(gòu)
        1.1.3 ALV-J復(fù)制過程
    1.2 膠原三螺旋重復(fù)蛋白1(CTHRC1)概述
        1.2.1 CTHRC1 結(jié)構(gòu)特征
        1.2.2 CTHRC1 生物學(xué)功能和表達(dá)調(diào)控
        1.2.3 CTHRC1 參與腫瘤的病理過程
    1.3 本研究的目的與意義
2.材料與方法
    2.1 主要試劑及耗材
    2.2 主要緩沖液
    2.3 試驗(yàn)地點(diǎn)
    2.4 實(shí)驗(yàn)設(shè)備
    2.5 細(xì)胞及毒株
        2.5.1 細(xì)胞的傳代培養(yǎng)
        2.5.2 細(xì)胞的接毒
        2.5.3 ALV-J感染SPF雞胚
    2.6 蛋白質(zhì)組學(xué)
    2.7 CTHRC1 堿基序列的優(yōu)化和CTHRC1 過表達(dá)載體的構(gòu)建
    2.8 CTHRC1 shRNA的設(shè)計(jì)與構(gòu)建
    2.9 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
    2.10 Real-time PCR/qPCR
        2.10.1 細(xì)胞總RNA的提取
        2.10.2 RNA逆轉(zhuǎn)錄為c DNA
        2.10.3 Real-time PCR
        2.10.4 ALV-J絕對(duì)熒光定量PCR體系的建立
    2.11 Western blot
        2.11.1 細(xì)胞裂解
        2.11.2 BCA法測定蛋白的濃度
        2.11.3 Western blot檢測蛋白表達(dá)水平
    2.12 免疫組織化學(xué)
    2.13 激光共聚焦
    2.14 免疫共沉淀
    2.15 ELISA
    2.16 數(shù)據(jù)分析
3.結(jié)果與分析
    3.1 ALV-J gp85 基因的絕對(duì)熒光定量PCR體系的建立
    3.2 CTHRC1 密碼子的優(yōu)化及酶切和測序鑒定
    3.3 基于蛋白質(zhì)組學(xué)分析,CTHRC1 高表達(dá)可能與ALV-J復(fù)制有關(guān)
    3.4 ALV-J 感染促進(jìn) CTHRC1 的表達(dá)
        3.4.1 在體外 ALV-J 激活 CTHRC1 的表達(dá)
        3.4.2 ALV-J感染促進(jìn)體內(nèi)CTHRC1 表達(dá)
    3.5 過表達(dá)CTHRC1 促進(jìn)ALV-J復(fù)制
    3.6 敲低 CTHRC1 抑制 ALV-J 復(fù)制
    3.7 CTHRC1和ALV-J的 SU蛋白互作
4.討論
5.結(jié)論
6.參考文獻(xiàn)
7.致謝
8.攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文及專利情況


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]膠原三螺旋重復(fù)蛋白-1參與疾病作用研究進(jìn)展[J]. 韓樂,張玲玲,魏偉.  中國藥理學(xué)通報(bào). 2017(07)
[2]CTHRC1與腫瘤關(guān)系的研究進(jìn)展[J]. 王萍,房靜遠(yuǎn).  生命科學(xué). 2010(08)
[3]腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移分子機(jī)制的研究進(jìn)展[J]. 黃海力,王孟薇.  生物技術(shù)通訊. 2006(01)



本文編號(hào)：3186229