豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）是影響世界養(yǎng)豬業(yè)的重要病原之一,造成巨大經(jīng)濟損失。PRRSV可通過多種途徑宿主逃避免疫應(yīng)答,包括調(diào)節(jié)IL-10、抑制巨噬細胞和樹突狀細胞功能和抑制Ⅰ型干擾素（IFN-α/β）產(chǎn)生等,從而導(dǎo)致病毒持續(xù)感染,但其分子機制尚不十分清楚。為了探究PRRSV編碼蛋白對TLR3和IL-10表達影響,本研究構(gòu)建了PRRSV部分非結(jié)構(gòu)蛋白的真核表達質(zhì)粒,證明Nsp1和Nsp11可以抑制TLR3啟動子活性,初步探索了其可能機制；同時還構(gòu)建了PRRSV結(jié)構(gòu)蛋白真核表達質(zhì)粒,證明GP5和N蛋白可以誘生IL-10表達；另外,還構(gòu)建了Nsp4,Nsp7,Nsp12的真核表達質(zhì)粒,觀察了其作為基因疫苗的免疫特性。具體研究內(nèi)如下：1.PRRSV 3個非結(jié)構(gòu)蛋白對TLR3啟動子活性的影響及其機理PRRSV ORF1a和ORF1b可以翻譯形成14個病毒非結(jié)構(gòu)蛋白,其中部分非結(jié)構(gòu)蛋白具有抑制I型干擾素活性的功能。TLR3是先天性免疫中重要的受體分子,它經(jīng)dsRNA刺激后可以誘導(dǎo)產(chǎn)生干擾素和促炎癥因子,啟動先天性免疫反應(yīng)。為了探究PRRSV非結(jié)構(gòu)蛋白對TLR3轉(zhuǎn)錄表達的影響,本研究構(gòu)建了... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：98 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 豬繁殖與呼吸綜合征病毒蛋白生物學(xué)結(jié)構(gòu)與免疫抑制機制研究進展
    1 病毒蛋白生物學(xué)結(jié)構(gòu)
        1.1 病毒基因組結(jié)構(gòu)與復(fù)制
        1.2 病毒結(jié)構(gòu)蛋白與生物學(xué)結(jié)構(gòu)
        1.3 病毒非結(jié)構(gòu)蛋白與生物學(xué)結(jié)構(gòu)
    2 病毒免疫抑制與分子機理
        2.1 Ⅰ型干擾素信號通路及PRRSV對其抑制作用
        2.2 白細胞介素-10及PRRSV對其誘生作用
    參考文獻
第二章 PRRSV 3個非結(jié)構(gòu)蛋白對TLR3啟動子活性的影響及其機理
    摘要
    1 材料和方法
        1.1 菌株、質(zhì)粒、細胞
        1.2 主要試劑
        1.3 重組真核表達質(zhì)粒的構(gòu)建
        1.4 目的基因真核質(zhì)粒表達與鑒定
        1.5 PRRSV NSPs對TLR3啟動子活性的影響
        1.6 不同劑量Nsp11對TLR3啟動子活性的影響
        1.7 PRRSV Nsp11對IFN-β啟動子活性的影響
        1.8 Ⅰ型干擾素對TLR3啟動子活性的影響
        1.9 Nsp11對INF-β誘導(dǎo)TLR3啟動子活性的影響
        1.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    2 結(jié)果
        2.1 非結(jié)構(gòu)蛋白基因的擴增
        2.2 重組表達質(zhì)粒的酶切鑒定
        2.3 目的基因在BHK-21細胞中的表達與鑒定
        2.4 PRRSV NSPs對TLR3啟動子活性的影響
        2.5 Nsp11對TLR3啟動子活性呈劑量依賴性抑制
        2.6 Nsp11對IFN-β啟動子活性的抑制
        2.7 Ⅰ型干擾素可以激發(fā)TLR3啟動子活性
        2.8 Nsp11以抑制INF-β誘導(dǎo)下的TLR3啟動子活性
    3 討論
    參考文獻
    ABSTRACT
第三章 PRRSV結(jié)構(gòu)蛋白的真核表達及其對IL-10啟動子活性的影響
    摘要
    1 材料和方法
        1.1 菌株、質(zhì)粒、細胞
        1.2 主要試劑
        1.3 重組真核表達質(zhì)粒的構(gòu)建
        1.4 目的基因真核質(zhì)粒表達與鑒定
        1.5 PRRSV結(jié)構(gòu)蛋白對IL-10啟動子活性的影響
        1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    2 結(jié)果
        2.1 PRRSV結(jié)構(gòu)蛋白基因PCR擴增
        2.2 重組真核表達質(zhì)粒的酶切鑒定
        2.3 PRRSV結(jié)構(gòu)蛋白基因的表達與鑒定
        2.4 PRRSV結(jié)構(gòu)蛋白對IL-10啟動子活性的影響
    3 討論
    參考文獻
    ABSTRACT
第四章 PRRSV NSP4和NSP7及NSP12基因疫苗的構(gòu)建與小鼠免疫特性
    摘要
    1 材料與方法
        1.1 病毒、菌株、質(zhì)粒、細胞與實驗動物
        1.2 主要試劑
        1.3 重組真核表達質(zhì)粒的構(gòu)建
        1.4 目的基因的真核表達與鑒定
        1.5 免疫用重組真核表達質(zhì)粒的制備
        1.6 Nsp4、Nsp7和Nsp12基因大腸桿菌表達與純化抗原的制備
        1.7 小鼠免疫實驗
        1.8 抗體效價的測定
        1.9 淋巴細胞增殖試驗
        1.10 細胞因子的測定
    2 結(jié)果
        2.1 Nsp4、Nsp7和Nsp12及GM-CSF基因的擴增
        2.2 Nsp4、Nsp7和Nsp12重組真核表達載體酶切鑒定
        2.3 Nsp4、Nsp7和Nsp12真核表達與鑒定
        2.4 目的基因原核表達與純化蛋白制各
        2.5 免疫小鼠ELISA抗體水平
        2.6 免疫小鼠淋巴細胞轉(zhuǎn)化增殖刺激指數(shù)
        2.7 細胞因子的測定
    3 討論
    參考文獻
    ABSTRACT
全文總結(jié)
致謝



本文編號：3185027