2005年管花肉蓯蓉被收錄入《中國(guó)藥典》中，然而它對(duì)性激素水平的影響及機(jī)制并不清楚，因此本試驗(yàn)旨在研究管花肉蓯蓉對(duì)雄性大鼠孕酮和睪酮水平的影響及其作用機(jī)制。CYP11A1和CYP17A1兩個(gè)酶是睪丸間質(zhì)細(xì)胞中睪酮合成路徑的關(guān)鍵酶，肝臟中的CYP3A4是睪酮和孕酮的代謝酶，研究這三種酶的變化對(duì)了解肉蓯蓉影響睪酮水平的機(jī)制非常重要。由于上述三種酶均屬于P450酶家族，存在于細(xì)胞微粒體中，故本研究首先要建立組織微粒體的制備方法。該項(xiàng)研究?jī)?nèi)容主要包括三個(gè)方面：1.微粒體制備方法的建立由于肝臟中含有豐富的P450酶，因此以肝臟作為研究對(duì)象，制備肝臟微粒體，建立鈣鹽沉淀法。計(jì)算得所制備微粒體的P450蛋白含量約為0.55nmol/mg，處于正常范圍內(nèi)（0.4-1.0nmol/mg）。采用CO還原差示光譜法檢測(cè)所制備的新鮮組織微粒體中總P450酶的活性，結(jié)果顯示樣品在波長(zhǎng)為450nm處有特異性吸收峰。底物探針?lè)z測(cè)微粒體中CYP2E1的酶活性，紫外分光光度法測(cè)其代謝產(chǎn)物的含量。結(jié)果均顯示所制備微粒體活性良好，表明該方法建立成功。2.管花肉蓯蓉提取物對(duì)雄性大鼠性激素水平的影響及機(jī)制研究干燥的管花肉蓯蓉... 

【文章來(lái)源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：56 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 肉蓯蓉的簡(jiǎn)介
    1.2 肉蓯蓉的植物學(xué)概況和分布
    1.3 肉蓯蓉的化學(xué)成分
        1.3.1 苯乙醇苷類
        1.3.2 環(huán)烯醚萜類
        1.3.3 其他成分
    1.4 肉蓯蓉的質(zhì)量控制
    1.5 肉蓯蓉的藥理作用
        1.5.1 補(bǔ)腎壯陽(yáng)
        1.5.2 促進(jìn)骨骼生成
        1.5.3 抗氧化和抗凋亡作用
        1.5.4 免疫調(diào)節(jié)作用
        1.5.5 神經(jīng)保護(hù)作用
        1.5.6 治療腸道疾病
        1.5.7 肝保護(hù)作用
        1.5.8 抗疼痛和抗炎作用
        1.5.9 抗疲勞作用
    1.6 睪酮合成路徑中的類固醇激素合成酶
        1.6.1 睪酮合成路徑
        1.6.2 類固醇激素合成酶
    1.7 化學(xué)物質(zhì)對(duì) CYP 酶的影響
    1.8 本研究的目的和意義
第二章 組織微粒體制備方法的建立
    2.1 材料
        2.1.1 試劑
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.3 所用溶液配制
        2.1.4 所用儀器
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 肝臟微粒體的制備
        2.2.2 肝臟微粒體蛋白濃度的測(cè)定
        2.2.3 所制備的微粒體蛋白活性鑒定
        2.2.4 CYP2E1 活性測(cè)定
    2.3 試驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 微粒體蛋白含量測(cè)定
        2.3.2 肝臟微粒體活性測(cè)定
        2.3.3 CYP2E1 酶活性的測(cè)定
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三章 管花肉蓯蓉對(duì)大鼠性激素水平的影響及部分機(jī)理研究
    3.1 材料
        3.1.1 藥材和試劑
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.3 所用溶液配制
        3.1.4 所用儀器
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 管花肉蓯蓉提取物的制備
        3.2.2 管花肉蓯蓉提取物中苯乙醇苷類物質(zhì)的含量測(cè)定
        3.2.3 給藥方案
        3.2.4 動(dòng)物處理
        3.2.5 激素水平測(cè)定
        3.2.6 睪丸和肝臟微粒體的制備
        3.2.7 微粒體蛋白濃度測(cè)定
        3.2.8 睪丸微粒體活性檢測(cè)
        3.2.9 CYP11A1、CYP17A1 和 CYP3A4 蛋白表達(dá)量檢測(cè)
        3.2.10 免疫組織化學(xué)法檢測(cè) CYP11A1 和 CYP17A1 蛋白表達(dá)量
    3.3 結(jié)果和分析
        3.3.1 管花肉蓯蓉提取物中苯乙醇苷類物質(zhì)的含量
        3.3.2 管花肉蓯蓉對(duì)雄性大鼠生殖系統(tǒng)器官的影響
        3.3.3 管花肉蓯蓉對(duì)雄性大鼠性激素水平的影響
        3.3.4 微粒體蛋白濃度測(cè)定
        3.3.5 微粒體活性鑒定
        3.3.6 Western Blot 法檢測(cè) CYP11A1、CYP17 A1 和 CYP3A4 的表達(dá)
        3.3.7 免疫組化法檢測(cè)睪丸組織中 CYP11A1 和 CYP17A1 的表達(dá)
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第四章 管花肉蓯蓉的毒性作用
    4.1 材料
        4.1.1 試劑
        4.1.2 所用溶液配制
        4.1.3 所用儀器
    4.2 試驗(yàn)方法
        4.2.1 肝臟和睪丸組織的石蠟切片制作
        4.2.2 石蠟切片 HE 染色
        4.2.3 血清中 ALT 水平的檢測(cè)
    4.3 結(jié)果和分析
        4.3.1 管花肉蓯蓉對(duì)大鼠肝指數(shù)及血清生化指標(biāo)的影響
        4.3.2 管花肉蓯蓉對(duì)大鼠肝臟組織的影響
        4.3.3 管花肉蓯蓉對(duì)大鼠睪丸組織的影響
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3183145