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高致病性藍(lán)耳。≒RRS)抗性基因標(biāo)記的篩選及其分子標(biāo)記檢測(cè)試劑盒的研制

發(fā)布時(shí)間:2021-05-10 13:53
  豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome, PRRS)是目前養(yǎng)豬業(yè)危害最大、控制最難的傳染病之一。疫苗免疫、藥物治療以及營(yíng)養(yǎng)保健等措施雖然在一定程度上控制了該病的蔓延,但是因?yàn)槠洳≡ㄋ{(lán)耳病病毒,PRRSV)存在較強(qiáng)的遺傳變異性、且能逃脫宿主免疫機(jī)制等特點(diǎn),難以有效地控制該病的發(fā)生。因此,近年來(lái)有關(guān)抗病育種研究和提高豬自身抗病力也成為藍(lán)耳病防治的一個(gè)新發(fā)展方向。本研究主要研究?jī)?nèi)容包括,(1)分析五個(gè)基因(MBL2、DUSP1、GBP2、Mx1、 NID2)的不同基因型分別在不同豬群中的頻率及其藍(lán)耳病發(fā)病相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)率、不同基因型母豬在藍(lán)耳病爆發(fā)期間的產(chǎn)死仔率(含死胎、木乃伊);(2)以本小組前期篩選獲得的與藍(lán)耳病發(fā)病相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)率相關(guān)的CD169基因C1654A變異位點(diǎn)為對(duì)象,初步研制了一個(gè)針對(duì)該位點(diǎn)的檢測(cè)試劑盒。本研究的目的在于:(1)篩選與藍(lán)耳病抗性相關(guān)的分子標(biāo)記;(2)研制出相應(yīng)的分子標(biāo)記檢測(cè)試劑盒,為將來(lái)分子輔助選擇育種打下基礎(chǔ)。本研究的主要研究結(jié)果如下:1、建立了MBL2基因外顯子6中A295G突變位點(diǎn)的AS-PC... 

【文章來(lái)源】:華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】:72 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】:碩士

【文章目錄】:
摘要
ABSTRACT
縮略詞表(Abbreviation words)
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 前言
    2 PRRS流行動(dòng)態(tài)
        2.1 國(guó)內(nèi)外流行特點(diǎn)
        2.2 PRRSV傳播方式
        2.3 PRRS的防治措施
    3 抗病育種的研究進(jìn)展
        3.1 抗病育種的意義
        3.2 抗病機(jī)理
        3.3 抗病育種的遺傳基礎(chǔ)
        3.4 抗病育種的措施
        3.5 抗病候選基因的研究進(jìn)展
    4 基因多態(tài)性分析的方法
        4.1 SNP
        4.2 PCR-RFLP
        4.3 AS-PCR
第二章 研究目的與意義
第三章 材料與方法
    1 試驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)豬群及樣本采集
        1.2 性狀記錄
    2 主要儀器及設(shè)備
    3 主要試劑及配制
        3.1 常用試劑
        3.2 主要試劑的配制
        3.3 Taq酶、回收試劑盒、測(cè)序和限制性?xún)?nèi)切酶
    4 試驗(yàn)方法
        4.1 豬基因組中提取DNA
        4.2 基因組DNA質(zhì)量和濃度的檢測(cè)
        4.3 主要分子生物學(xué)軟件和數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析軟件
        4.4 PCR引物的稀釋
        4.5 AS-PCR反應(yīng)體系及反應(yīng)程序
        4.6 PCR-RFLP分析
        4.7 PCR產(chǎn)物的回收測(cè)序
    5 分子標(biāo)記的統(tǒng)計(jì)分析方法
        5.1 等位基因頻率和基因型頻率
        5.2 各基因型發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)度分析
    6 五個(gè)候選基因SNP篩選及其檢測(cè)
        6.1 豬MBL2基因SNP位點(diǎn)檢測(cè)
        6.2 豬DUSP1基因SNP位點(diǎn)檢測(cè)
        6.3 豬GBP2基因SNP位點(diǎn)檢測(cè)
        6.4 豬Mx1基因SNP位點(diǎn)檢測(cè)
        6.5 豬NID2基因SNP位點(diǎn)檢測(cè)
    7 藍(lán)耳病抗性分子標(biāo)記(SNP)檢測(cè)試劑盒的研制
        7.1 試劑組分的探討
        7.2 試劑保質(zhì)期的探討
        7.3 試劑盒特異性的分析
        7.4 試劑盒靈敏度的分析
        7.5 試劑盒的外包裝和內(nèi)容
        7.6 試劑盒的操作使用說(shuō)明
第四章 結(jié)果與分析
    1 豬五個(gè)候選基因SNP及其藍(lán)耳病抗性遺傳效應(yīng)的分析
        1.1 豬MBL2基因SNP及其藍(lán)耳病抗性遺傳效應(yīng)的分析
        1.2 豬DUSP1基因SNP及其藍(lán)耳病抗性遺傳效應(yīng)的分析
        1.3 豬GBP2基因SNP及其藍(lán)耳病抗性遺傳效應(yīng)的分析
        1.4 豬Mx1基因SNP及其藍(lán)耳病抗性遺傳效應(yīng)的分析
        1.5 豬NID2基因SNP及其藍(lán)耳病抗性遺傳效應(yīng)的分析
    2 藍(lán)耳病抗性分子標(biāo)記(SNP)檢測(cè)試劑盒的研制
        2.1 試劑盒組分探索試驗(yàn)及保質(zhì)期的探討
        2.2 試劑盒特異性的分析
        2.3 試劑盒靈敏度檢測(cè)的探討
        2.4 試劑盒的外包裝和內(nèi)容
        2.5 試劑盒操作說(shuō)明書(shū)的擬定
第五章 討論
    1 關(guān)于藍(lán)耳病抗性SNPs的篩選
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料以及方法的分析
        1.2 候選基因多態(tài)性與豬藍(lán)耳病抗性的關(guān)聯(lián)分析
    2 關(guān)于藍(lán)耳病抗性分子標(biāo)記檢測(cè)試劑盒的分析
        2.1 藍(lán)耳病抗性分子標(biāo)記檢測(cè)試劑盒研制的前景
        2.2 關(guān)于試劑盒的性能
    3 小結(jié)
        3.1 本研究的主要結(jié)果結(jié)論
        3.2 本研究的創(chuàng)新點(diǎn)
        3.3 本研究的不足之處與下一步計(jì)劃
參考文獻(xiàn)
在校期間發(fā)表文章
附錄
致謝


【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào):3179478

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