ALV-J主要引起雞的骨髓細胞瘤（Myelocytoma）或骨髓白血病（Myeloid20Leukosis，ML）和多種細胞類型的惡性腫瘤。近年來我國蛋雞群出現(xiàn)ALV-J感染病例的報道不斷增加，在我國J亞群白血病已由最初只有肉用雞感染發(fā)病，逐漸向商品蛋雞和中國許多地方品種雞蔓延，其宿主范圍正在擴大，腫瘤表型也在不斷變化。本研究選擇早期分離自肉雞髓樣細胞瘤病例的NX0101株和近期分離自蛋雞血管瘤病例的HN10PY01株J亞群禽白血病病毒，分別接種DF-1細胞、SPF蛋雞CEF細胞及白羽肉雞父母代CEF細胞，在感染后1、2、3、5、7天分別收集細胞和細胞上清。檢測細胞上清ALV群特異性抗原p27的表達量、病毒TCID50，比較研究兩毒株對不同來源的CEF細胞的易感性及在不同細胞上的復制能力；收集細胞用熒光定量法檢測感染細胞的原癌基因（c-myc、c-myb）、抑癌基因（p53、p27、p16）和凋亡基因（Bcl-2）以及細胞熱應激蛋白HSP70和HSP60基因的mRNA表達量；并用ELISA方法檢測細胞上清中熱應激蛋白HSP70和HSP60的表達量；通過凋亡試劑盒檢測感染細胞的凋亡狀況，... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學山東省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
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中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 病毒的分類
    1.2 J 亞群禽白血病的病原學與分子病毒學
    1.3 ALV-J 的致病性和致瘤機理
    1.4 腫瘤相關基因
        1.4.1 癌基因
        1.4.2 抑癌基因
        1.4.3 凋亡基因 Bcl-2
    1.5 熱應激蛋白
    1.6 本研究的目的意義
2 材料和方法
    2.1 材料
        2.1.1 病毒
        2.1.2 主要材料
        2.1.3 主要儀器
    2.2 方法
        2.2.1 病毒的增殖
        2.2.2 病毒的定量
        2.2.3 前病毒基因組 DNA 提取
        2.2.4 特異性 PCR 檢測
    2.3 不同來源的 ALV-J 體外細胞感染實驗
        2.3.1 實驗設計
        2.3.2 雞胚成纖維細胞制作
        2.3.3 肉雞 CEF 外源性禽白血病病毒鑒定
        2.3.4 細胞鋪板及病毒接種
        2.3.5 收集細胞及細胞上清
        2.3.6 ALV 特異性抗體 p27 的檢測
        2.3.7 腫瘤相關基因檢測
        2.3.8 ELISA 法檢測熱應激蛋白 HSP60、HSP70 的含量
        2.3.9 TUNEL 試劑盒檢測細胞凋亡數(shù)量差異
3 結(jié)果
    3.1 病毒定量
    3.2 特異性 PCR 檢測
    3.3 肉雞 CEF 外源性禽白血病病毒鑒定結(jié)果
    3.4 復制能力比較檢測結(jié)果
        3.4.1 ALV 群特異性抗體的檢測
        3.4.2 毒力檢測
    3.5 腫瘤相關基因檢測結(jié)果
        3.5.1 Real-time PCR 標準曲線的建立
        3.5.2 利用 Real-time PCR 檢測 ALV-J 感染靶細胞腫瘤相關基因表達
    3.6 ELISA 法檢測熱應激蛋白 HSP70、HSP60 的含量
        3.6.1 HSP70 ELISA 檢測結(jié)果
        3.6.2 HSP60 ELISA 檢測結(jié)果
    3.7 凋亡試劑盒檢測結(jié)果
4 討論
    4.1 復制能力比較
    4.2 腫瘤相關基因檢測
    4.3 熱應激蛋白檢測
    4.4 細胞凋亡數(shù)量檢測
5 結(jié)論
6 參考文獻
致謝
碩士期間發(fā)表論文情況


【參考文獻】：
期刊論文
[1]HSP60和p53在胃癌中的表達及意義[J]. 李桂青.  臨床消化病雜志. 2014(01)
[2]蛋雞J亞群禽白血病病毒SD1009分離株的分離鑒定及全基因組序列分析[J]. 王琦,王永強,康忠惠,高玉龍,潘偉,李久寬,秦立廷,祁小樂,高宏雷,王笑梅.  中國預防獸醫(yī)學報. 2011(08)
[3]熱休克蛋白60與細胞凋亡[J]. 曹智,馬駿,袁文俊,林麗.  生理科學進展. 2008(03)
[4]Two20distinct20pathways20of20p1620gene20inactivation20in20gallbladder20cancer[J]. Hiroyuki Tadokoro,Takako Shigihara,Tomomi Ikeda,Masaru Takase,Masafumi Suyama.  World Journal of Gastroenterology. 2007(47)
[5]禽白血病病毒J亞群內(nèi)蒙株的分離與鑒定[J]. 楊玉瑩,葉建強,趙振華,秦愛建,顧玉芳.  中國病毒學. 2003(05)
[6]HSP60和CD44V6在胃腺癌中的表達及其意義[J]. 陳志芬,鄧長生,夏冰,朱尤慶,曾俊,龔玲玲.  世界華人消化雜志. 2001(09)

博士論文
[1]蛋雞ALV-J的分離鑒定及分子致瘤機制的研究[D]. 曲悅.山東農(nóng)業(yè)大學 2012
[2]禽白血病病毒J亞群（ALV-J）內(nèi)蒙株的建立及致瘤機理的研究[D]. 成子強.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學 2002



本文編號：3178904