毛色是山羊重要的經(jīng)濟(jì)性狀,同時(shí)也是識(shí)別動(dòng)物品種的重要標(biāo)志,對(duì)山羊毛色遺傳規(guī)律的研究,有利于獲得育種目標(biāo)所確定的或者市場(chǎng)所要求的毛色類型。miRNA是一類內(nèi)源性、單鏈小分子RNA,通過與靶基因互補(bǔ)配對(duì),從而導(dǎo)致靶基因mRNA的降解,抑制蛋白質(zhì)的合成,最終參與機(jī)體多種生命活動(dòng)。但目前這兩者之間的研究較少,本試驗(yàn)旨在研究毛色相關(guān)miRNA及其靶基因在不同品種、不同月齡山羊皮膚中的表達(dá),為探究miRNA對(duì)毛色形成的影響機(jī)制奠定基礎(chǔ),為解析毛色相關(guān)miRNA在山羊被毛顏色形成中的作用提供參考。首先,本試驗(yàn)選取飼養(yǎng)在西南大學(xué)種羊場(chǎng)的大足黑山羊、內(nèi)蒙古絨山羊以及不同年齡階段（0月齡、2月齡、6月齡和12月齡）的大足黑山羊內(nèi)蒙古絨山羊雜交F₁代山羊各6只,手術(shù)法采集其皮膚及毛發(fā)。測(cè)定不同品種、不同月齡山羊皮膚及毛發(fā)中黑色素含量以及黑色素在皮膚中的表達(dá)部位,同時(shí)利用熒光定量PCR測(cè)定miRNA及其靶基因在皮膚中的表達(dá)情況。之后利用Western20blot及免疫組化研究靶基因在蛋白水平的表達(dá)情況及其蛋白在皮膚中的表達(dá)部位。主要研究結(jié)果如下:1、大足黑山羊皮膚及毛發(fā)中黑色素含量均顯著... 

【文章來源】：西南大學(xué)重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
常用中英文縮略詞表
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 動(dòng)物毛色與黑色素
        1.1.1 山羊毛色
        1.1.2 黑色素
    1.2 黑色素合成相關(guān)信號(hào)通路
        1.2.1 cAMP信號(hào)通路
        1.2.2 PKC信號(hào)通路
        1.2.3 MAPK信號(hào)通路
        1.2.4 NO信號(hào)通路
        1.2.5 Wnt信號(hào)通路
    1.3 黑色素合成重要基因
        1.3.1 TYR
        1.3.2 MITF
        1.3.3 ASIP
    1.4 miRNA與毛色的關(guān)系
        1.4.1 miRNA
        1.4.2 毛色相關(guān)miRNAs
第2章 引言
    2.1 研究目的與意義
    2.2 技術(shù)路線
第3章 試驗(yàn)材料與方法
    3.1 試驗(yàn)材料
        3.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)耗材
    3.2 試驗(yàn)試劑與儀器
        3.2.1 主要藥品和試劑
        3.2.2 主要儀器設(shè)備
        3.2.3 主要試劑及其配制成分
    3.3 試驗(yàn)方法
        3.3.1 試驗(yàn)組織獲取
        3.3.2 皮膚黑色素提取
        3.3.3 毛發(fā)黑色素提取
        3.3.4 黑色素標(biāo)準(zhǔn)曲線制作
        3.3.5 黑色素染色
        3.3.6 RNA提取(Trizol抽提法)
        3.3.7 c DNA第一條鏈合成及q RT-PCR
        3.3.8 免疫組化
        3.3.9 總蛋白提取、濃度測(cè)定
        3.3.10 Western Blotting
        3.3.11 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
第4章 試驗(yàn)結(jié)果與分析
    4.1 不同品種、不同月齡山羊皮膚采集及其黑色素含量測(cè)定
        4.1.1 山羊皮膚及羊毛采集
        4.1.2 不同品種山羊皮膚及毛發(fā)黑色素含量測(cè)定
        4.1.3 不同月齡山羊皮膚及毛發(fā)黑色素含量
        4.1.4 不同品種山羊皮膚黑色素染色
        4.1.5 不同月齡山羊皮膚黑色素染色
    4.2 毛色相關(guān)miRNAs在不同品種、不同月齡山羊皮膚中的表達(dá)
        4.2.1 毛色相關(guān)miRNAs的篩選
        4.2.2 miRNA和 U6 的擴(kuò)增曲線和熔解曲線
        4.2.3 毛色相關(guān)miRNAs在不同品種山羊皮膚中的表達(dá)
        4.2.4 毛色相關(guān)miRNAs在不同月齡山羊皮膚中的表達(dá)
    4.3 靶基因在不同品種、不同月齡山羊皮膚中的表達(dá)
        4.3.1 miRNAs靶基因預(yù)測(cè)及篩選
        4.3.2 山羊皮膚RNA完整性檢測(cè)
        4.3.3 靶基因在不同品種山羊皮膚中的表達(dá)
        4.3.4 靶基因在不同月齡山羊皮膚中的表達(dá)
        4.3.5 TYR、MITF蛋白質(zhì)水平表達(dá)情況
        4.3.6 TYR蛋白在山羊皮膚中的表達(dá)部位
第5章 討論
    5.1 山羊皮膚研磨方法
        5.1.1 皮膚組織結(jié)構(gòu)
        5.1.2 傳統(tǒng)組織研磨方式
    5.2 皮膚毛囊
        5.2.1 毛囊生長(zhǎng)規(guī)律
        5.2.2 山羊毛囊周期
    5.3 miRNAs在山羊皮膚中的表達(dá)
        5.3.1 miR-129-5p
        5.3.2 miR-148a
        5.3.3 miR-381-3p
        5.3.4 miR-543-3p和 miR-544-5p
    5.4 靶基因在山羊皮膚中的表達(dá)
        5.4.1 TYR
        5.4.2 MITF
        5.4.3 EP300
        5.4.4 GSK3β、FZD
        5.4.5 EDN1、PLCB
    5.5 miRNAs與靶基因之間的相互作用
第6章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
發(fā)表論文一覽表


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]陜北白絨山羊毛囊干細(xì)胞增殖分化相關(guān)miRNA的鑒定及功能研究[D]. 閆海龍.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2019
[2]miR-129-5p靶向Wnt5a調(diào)控PKC/ERK/NF-κB和JNK信號(hào)通路抑制膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展的機(jī)制研究[D]. 李嚴(yán).南京醫(yī)科大學(xué) 2018
[3]microRNA-5110共靶Wnt1和MLPH調(diào)控黑色素細(xì)胞內(nèi)色素沉積的作用機(jī)制研究[D]. 楊?yuàn)檴?山西農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[4]內(nèi)蒙古絨山羊胎兒期皮膚毛囊形態(tài)發(fā)生和發(fā)育規(guī)律及部分Hox基因家族成員研究[D]. 張燕軍.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007

碩士論文
[1]蒙古馬被毛毛囊形態(tài)及周期與黑色素合成相關(guān)基因的研究[D]. 李超.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2019
[2]豬MC1R、ASIP、TYR、TYRP1和SLC45A2基因多態(tài)性及其與毛色相關(guān)性研究[D]. 彭剛.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2019
[3]菲律賓蛤仔與殼色相關(guān)microRNA的發(fā)掘和初步驗(yàn)證[D]. 溫嬙.大連海洋大學(xué) 2019
[4]miR-100-5p與FGF21對(duì)羊駝黑色素細(xì)胞色素生成的調(diào)控[D]. 王瑞瑋.山西農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[5]豬肌內(nèi)脂肪差異性沉積關(guān)鍵基因鑒定及AQP3的功能研究[D]. 楊晶.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2018
[6]大足黑山羊和內(nèi)蒙古絨山羊雜交F1代遺傳特征分析[D]. 張繼攀.西南大學(xué) 2018
[7]內(nèi)皮素1（EDN1）對(duì)綿羊皮膚黑色素細(xì)胞內(nèi)黑色素生成的影響[D]. 龐亞妙.山西農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[8]山羊胎兒皮膚黑色素生成有關(guān)miRNA的篩選與鑒定[D]. 孫武.西南大學(xué) 2015
[9]絨山羊毛囊周期性變化與興盛期毛囊KAP13-1基因的表達(dá)[D]. 李長(zhǎng)青.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005



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