為了初步探討綿羊癢螨巨噬細(xì)胞遷移抑制因子（PoMIF）對健康新西蘭兔外周血單個核細(xì)胞（PBMC）中Th1/Th2和Th17/Treg細(xì)胞平衡的變化。采用RT-PCR從綿羊癢螨總RNA中擴增得到MIF全長基因,經(jīng)原核表達(dá)、純化重組PoMIF（rPoMIF）蛋白,并分析其氧化還原酶和互變異構(gòu)酶活性。篩選與健康新西蘭兔PBMC孵育的最佳rPoMIF濃度,且用最佳濃度rPoMIF(0.2μg·mL^-1)與PBMC共同孵育0、1、6、12、24、36 h后收集細(xì)胞,用熒光定量PCR檢測其Th1/Th2/Th17/Treg細(xì)胞相對應(yīng)的特征性轉(zhuǎn)錄因子T-bet/GATA-3/RORc/Foxp3和特征性細(xì)胞因子IFN-γ/IL-4/IL-17A/IL-10 mRNA表達(dá)變化。結(jié)果表明:PoMIF全長363 bp,rPoMIF大小為32 ku（含pET32a標(biāo)簽蛋白19 ku）,且具有互變異構(gòu)酶活性;rPoMIF刺激后PBMC中Th1細(xì)胞的T-bet和IFN-γ先下降后上升,Th2細(xì)胞的GATA-3和IL-4均呈下降趨勢,且T-bet/GATA-3和IFN-γ/IL-4比值在12... 

【文章來源】：畜牧獸醫(yī)學(xué)報. 2020,51(03)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 主要儀器和試劑
    1.2 實驗動物
    1.3 螨蟲收集、總RNA的提取和cDNA反轉(zhuǎn)錄
    1.4 PoMIF基因的克隆、表達(dá)與純化
    1.5 PoMIF內(nèi)毒素去除及酶活測定
    1.6 兔PBMC的分離、培養(yǎng)和分組處理
    1.7 PBMC的實時熒光定量PCR檢測
    1.8 統(tǒng)計學(xué)分析
2 結(jié) 果
    2.1 PoMIF的擴增、原核表達(dá)和純化
    2.2 rPoMIF內(nèi)毒素去除及酶活測定
    2.3 實時熒光定量PCR檢測兔PBMC中免疫相關(guān)因子的mRNA水平
        2.3.1 最佳rPoMIF濃度的篩選
        2.3.2 兔PBMC中轉(zhuǎn)錄因子與細(xì)胞因子變化
3 討 論
    3.1 MIF的催化活性
    3.2 MIF的細(xì)胞因子功能和其濃度有關(guān)
    3.3 rPoMIF對兔PBMC Th1/Th2和Th17/Treg細(xì)胞平衡的影響
4 結(jié) 論



本文編號：3174470