家兔的毛皮尤以獺兔皮柔軟、美觀、輕便、保暖性好,倍受眾多消費(fèi)者的青睞,是一種非常重要的經(jīng)濟(jì)性狀。哺乳動(dòng)物毛色形成主要受多種多樣的相關(guān)基因調(diào)控。本試驗(yàn)通過(guò)基因芯片技術(shù)比較青紫藍(lán)色獺兔和白色獺兔背部皮膚組織樣基因的表達(dá)差異,利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)驗(yàn)證芯片結(jié)果,結(jié)合生物信息學(xué)分析和國(guó)內(nèi)外學(xué)者的研究報(bào)道,進(jìn)一步篩選與毛色形成相關(guān)差異候選基因進(jìn)行后續(xù)研究,以期為獺兔毛色遺傳機(jī)制提供一定的基礎(chǔ)。本試驗(yàn)的主要結(jié)果如下：1.利用表達(dá)譜芯片技術(shù)篩選3組全同胞青紫藍(lán)色獺兔和白色獺兔背部皮膚組織中的差異表達(dá)基因,發(fā)現(xiàn)有89個(gè)共有的差異基因在三組中表達(dá)趨勢(shì)一致。通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)Creb1、Wnt2、Gnaq和Gna14這4個(gè)基因在組織樣中的表達(dá)量進(jìn)行檢測(cè),驗(yàn)證基因芯片結(jié)果。結(jié)果表明芯片的結(jié)果相對(duì)可靠。結(jié)合生物信息學(xué)分析和文獻(xiàn)報(bào)道,找到了Creb1、TH、Wnt2、Gnaq、Dvl1、Mapkl2等可能與毛色形成相關(guān)的基因。Creb磷酸化可以活化下游MTTF基因的表達(dá),進(jìn)而激活TYR基因轉(zhuǎn)錄,促進(jìn)黑色素生成。因此,我們選擇Crebl基因作進(jìn)一步研究。2.克隆了獺兔Creb1基因編碼序列,并將其與... 

【文章來(lái)源】：揚(yáng)州大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：66 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
符號(hào)說(shuō)明
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 獺兔的品種簡(jiǎn)介
        1.1 獺兔的體型外貌
        1.2 獺兔的繁殖性能
        1.3 獺兔的產(chǎn)肉性能
        1.4 獺兔的毛皮性能
        1.5 獺兔品種的色型特征
    2 基因芯片技術(shù)簡(jiǎn)介
        2.1 基因芯片的概念及原理
        2.2 基因芯片的分類及特點(diǎn)
        2.3 基因芯片技術(shù)的應(yīng)用
    3 與哺乳動(dòng)物毛色形成相關(guān)的部分信號(hào)通路和基因
        3.1 環(huán)腺苷酸-蛋白激酶A(cAMP-PKA)信號(hào)通路
        3.2 Wnt/β-catenin信號(hào)通路
        3.3 黑素皮質(zhì)素受體1基因(MClR)
        3.4 cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白1(Creb1)
        3.5 小眼畸形相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子(MITF)
        3.6 酷氨酸酶（TYR)及酪氨酸酶相關(guān)蛋白（TYRP1、TYRP2)
    4 本研究的目的和意義
第二章 基因芯片篩選獺兔毛色形成相關(guān)基因的初步探究
    1 材料與方法
        1.1 樣本采集
        1.2 基因芯片
        1.3 儀器與試劑
        1.4 RNA提取和純化
        1.5 芯片實(shí)驗(yàn)
        1.6 引物設(shè)計(jì)及合成
        1.7 cDNA制備
        1.8 熒光定量PCR驗(yàn)證
    2 結(jié)果
        2.1 差異表達(dá)基因
        2.2 GO分類結(jié)果
        2.3 與毛色相關(guān)差異基因所在的信號(hào)通路
        2.4 qRT-PCR驗(yàn)證差異基因
    3 討論
第三章 獺兔Creb1基因的CDs克隆、生物信息學(xué)分析及真核載體構(gòu)建
    1 材料與方法
        1.1 試驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 試劑與儀器
        1.3 試驗(yàn)方法
    2 結(jié)果與分析
        2.1 獺兔Creb1基因編碼區(qū)的擴(kuò)增
        2.2 克隆質(zhì)粒的酶切鑒定
        2.3 重組表達(dá)質(zhì)粒的鑒定結(jié)果
        2.4 序列分析及同源性比較結(jié)果
        2.5 獺兔與其它物種的系統(tǒng)進(jìn)化分析
        2.6 Creb1蛋白二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
    3 討論
第四章 Creb1基因編碼序列多態(tài)性檢測(cè)
    1 材料與方法
        1.1 試驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 主要儀器
        1.3 主要試劑及其配制
        1.4 DNA提取
        1.5 DNA濃度和純度檢測(cè)
        1.6 引物設(shè)計(jì)
        1.7 PCR擴(kuò)增
        1.8 PCR產(chǎn)物檢測(cè)
        1.9 PCR-SSCP檢測(cè)
    2 結(jié)果與分析
        2.1 Creb1基因各外顯子的瓊脂糖凝膠電泳(AGE)結(jié)果
        2.2 Creb1基因各外顯子的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(N-PAGE)結(jié)果
    3 討論
第五章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表和參與發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]基于表達(dá)譜芯片挖掘抗豬瘟病毒相關(guān)基因及其在不同豬瘟抗體水平下的表達(dá)差異[J]. 王曉鑠,俞英,劉會(huì)杰,肖麗,翟立維,敖紅,王楚端.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2014(01)
[2]水稻與稻瘟病菌不同小種互作的基因差異表達(dá)譜分析[J]. 姜兆遠(yuǎn),任金平,劉曉梅,鄒曉威,郭曉莉,王繼春,溫嘉偉,劉文平,夏海豐,洪德志.  中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué). 2013(24)
[3]論耳聾基因突變位點(diǎn)檢測(cè)篩查的方法分析[J]. 郭伊荃.  中外醫(yī)療. 2013(28)
[4]基因芯片分析魚(yú)藤素對(duì)斑馬魚(yú)胚胎發(fā)育的影響[J]. 李文浩,劉瑞瑾,吳新榮.  中國(guó)組織工程研究. 2013(37)
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[6]液相基因芯片法同時(shí)檢測(cè)3種食源性病原菌[J]. 郭啟新,張蕾,張柏棋,趙浩軍,韓勤,毛永楊,彭飛進(jìn),李蘇龍.  食品科學(xué). 2013(16)
[7]鄰苯二甲酸二異丁酯對(duì)小鼠海馬cAMP/PKA-CREB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響[J]. 馬寧,王小丹,高芃,徐海濱.  衛(wèi)生研究. 2013(03)
[8]基因芯片技術(shù)與涂片培養(yǎng)技術(shù)對(duì)診斷兒童結(jié)核病的比較研究[J]. 鄧建軍,肖國(guó)光,萬(wàn)朝敏,曾崇亮,曹玲,舒敏,母得志,周偉.  四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2013(03)
[9]基因芯片技術(shù)篩選哮喘大鼠差異表達(dá)基因的研究[J]. 劉鑫,熊花,劉斌,王小莉,羅曉青,黃艷.  中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志. 2013(10)
[10]應(yīng)用基因芯片研究漢黃芩素對(duì)肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用機(jī)制[J]. 李美德,黎金濃,曹治云,陳旭征,杜建,黃寶康,廖聯(lián)明.  腫瘤學(xué)雜志. 2013(03)

博士論文
[1]不同被毛密度獺兔皮膚組織的差異表達(dá)基因篩選和CCNA2基因的多態(tài)性檢測(cè)及其與被毛密度的相關(guān)性研究[D]. 陳賽娟.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[2]幾種中藥有效成分促黑色素生成的機(jī)制研究[D]. 姜澤群.華中科技大學(xué) 2009
[3]丹皮酚抑制黑素合成相關(guān)分子機(jī)制的研究及KC-MC共培養(yǎng)體系中細(xì)胞因子對(duì)黑素合成的反饋調(diào)節(jié)[D]. 卜今.中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué) 2008

碩士論文
[1]利用表達(dá)譜芯片技術(shù)篩選家兔肌肉發(fā)育相關(guān)基因[D]. 李挺.揚(yáng)州大學(xué) 2013
[2]家兔MITF基因同源性、多態(tài)性分析及不同時(shí)期表達(dá)水平研究[D]. 何孟頡.揚(yáng)州大學(xué) 2012
[3]采用基因芯片篩選棉花產(chǎn)量性狀相關(guān)基因[D]. 張利媛.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[4]豬SREBPs和CREB-1基因的克隆、染色體定位及其功能研究[D]. 聶濤.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005



本文編號(hào)：3173594