家兔的毛皮尤以獺兔皮柔軟、美觀、輕便、保暖性好,倍受眾多消費者的青睞,是一種非常重要的經(jīng)濟性狀。哺乳動物毛色形成主要受多種多樣的相關(guān)基因調(diào)控。本試驗通過基因芯片技術(shù)比較青紫藍色獺兔和白色獺兔背部皮膚組織樣基因的表達差異,利用實時熒光定量PCR技術(shù)驗證芯片結(jié)果,結(jié)合生物信息學分析和國內(nèi)外學者的研究報道,進一步篩選與毛色形成相關(guān)差異候選基因進行后續(xù)研究,以期為獺兔毛色遺傳機制提供一定的基礎(chǔ)。本試驗的主要結(jié)果如下：1.利用表達譜芯片技術(shù)篩選3組全同胞青紫藍色獺兔和白色獺兔背部皮膚組織中的差異表達基因,發(fā)現(xiàn)有89個共有的差異基因在三組中表達趨勢一致。通過實時熒光定量PCR技術(shù)對Creb1、Wnt2、Gnaq和Gna14這4個基因在組織樣中的表達量進行檢測,驗證基因芯片結(jié)果。結(jié)果表明芯片的結(jié)果相對可靠。結(jié)合生物信息學分析和文獻報道,找到了Creb1、TH、Wnt2、Gnaq、Dvl1、Mapkl2等可能與毛色形成相關(guān)的基因。Creb磷酸化可以活化下游MTTF基因的表達,進而激活TYR基因轉(zhuǎn)錄,促進黑色素生成。因此,我們選擇Crebl基因作進一步研究。2.克隆了獺兔Creb1基因編碼序列,并將其與... 

【文章來源】：揚州大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
符號說明
第一章 文獻綜述
    1 獺兔的品種簡介
        1.1 獺兔的體型外貌
        1.2 獺兔的繁殖性能
        1.3 獺兔的產(chǎn)肉性能
        1.4 獺兔的毛皮性能
        1.5 獺兔品種的色型特征
    2 基因芯片技術(shù)簡介
        2.1 基因芯片的概念及原理
        2.2 基因芯片的分類及特點
        2.3 基因芯片技術(shù)的應(yīng)用
    3 與哺乳動物毛色形成相關(guān)的部分信號通路和基因
        3.1 環(huán)腺苷酸-蛋白激酶A(cAMP-PKA)信號通路
        3.2 Wnt/β-catenin信號通路
        3.3 黑素皮質(zhì)素受體1基因(MClR)
        3.4 cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白1(Creb1)
        3.5 小眼畸形相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子(MITF)
        3.6 酷氨酸酶（TYR)及酪氨酸酶相關(guān)蛋白（TYRP1、TYRP2)
    4 本研究的目的和意義
第二章 基因芯片篩選獺兔毛色形成相關(guān)基因的初步探究
    1 材料與方法
        1.1 樣本采集
        1.2 基因芯片
        1.3 儀器與試劑
        1.4 RNA提取和純化
        1.5 芯片實驗
        1.6 引物設(shè)計及合成
        1.7 cDNA制備
        1.8 熒光定量PCR驗證
    2 結(jié)果
        2.1 差異表達基因
        2.2 GO分類結(jié)果
        2.3 與毛色相關(guān)差異基因所在的信號通路
        2.4 qRT-PCR驗證差異基因
    3 討論
第三章 獺兔Creb1基因的CDs克隆、生物信息學分析及真核載體構(gòu)建
    1 材料與方法
        1.1 試驗動物
        1.2 試劑與儀器
        1.3 試驗方法
    2 結(jié)果與分析
        2.1 獺兔Creb1基因編碼區(qū)的擴增
        2.2 克隆質(zhì)粒的酶切鑒定
        2.3 重組表達質(zhì)粒的鑒定結(jié)果
        2.4 序列分析及同源性比較結(jié)果
        2.5 獺兔與其它物種的系統(tǒng)進化分析
        2.6 Creb1蛋白二級和三級結(jié)構(gòu)預(yù)測
    3 討論
第四章 Creb1基因編碼序列多態(tài)性檢測
    1 材料與方法
        1.1 試驗動物
        1.2 主要儀器
        1.3 主要試劑及其配制
        1.4 DNA提取
        1.5 DNA濃度和純度檢測
        1.6 引物設(shè)計
        1.7 PCR擴增
        1.8 PCR產(chǎn)物檢測
        1.9 PCR-SSCP檢測
    2 結(jié)果與分析
        2.1 Creb1基因各外顯子的瓊脂糖凝膠電泳(AGE)結(jié)果
        2.2 Creb1基因各外顯子的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(N-PAGE)結(jié)果
    3 討論
第五章 全文結(jié)論
參考文獻
致謝
攻讀學位期間發(fā)表和參與發(fā)表的學術(shù)論文目錄


【參考文獻】：
期刊論文
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[3]論耳聾基因突變位點檢測篩查的方法分析[J]. 郭伊荃.  中外醫(yī)療. 2013(28)
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博士論文
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[3]丹皮酚抑制黑素合成相關(guān)分子機制的研究及KC-MC共培養(yǎng)體系中細胞因子對黑素合成的反饋調(diào)節(jié)[D]. 卜今.中國協(xié)和醫(yī)科大學 2008

碩士論文
[1]利用表達譜芯片技術(shù)篩選家兔肌肉發(fā)育相關(guān)基因[D]. 李挺.揚州大學 2013
[2]家兔MITF基因同源性、多態(tài)性分析及不同時期表達水平研究[D]. 何孟頡.揚州大學 2012
[3]采用基因芯片篩選棉花產(chǎn)量性狀相關(guān)基因[D]. 張利媛.華中農(nóng)業(yè)大學 2011
[4]豬SREBPs和CREB-1基因的克隆、染色體定位及其功能研究[D]. 聶濤.華中農(nóng)業(yè)大學 2005



本文編號：3173594