鴨疫里氏桿菌（Riemerella anatipestifer，RA）是對鴨場造成重大經(jīng)濟(jì)損失病原菌之一。本試驗(yàn)首先依據(jù)鴨疫里氏桿菌的生物學(xué)特性建立生理生化鑒定方法；其次還對其16S rRNA （16S ribosomal RNA）進(jìn)行研究；再次針對外膜蛋白（OuterMembrane Protein A，OmpA）區(qū)域的部分基因設(shè)計(jì)檢測引物，建立RA的PCR的檢測方法；最后對分離到的RA進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。針對外膜蛋白區(qū)域部分基因設(shè)計(jì)的引物具有良好的特異性，不會(huì)對大腸桿菌、沙門氏菌、副豬嗜血桿菌、豬丹毒桿菌等發(fā)生擴(kuò)增，可用于臨床上對RA的鑒別。試驗(yàn)病料來自于江西豐城地區(qū)的鴨場，分別將疑似病鴨腦組織和肝臟組織樣品接種于TSA培養(yǎng)基，經(jīng)過細(xì)菌分離純化，初步共分離到10株疑似RA的菌株，利用建立的PCR檢測方法對其進(jìn)行檢測，結(jié)果表明，10株可疑菌株均為RA。而后針對RA的16S rRNA設(shè)計(jì)了一對PCR引物，16S rRNA由于是細(xì)菌種屬間的高度保守序列，一般不用于細(xì)菌鑒定，但可用來分析細(xì)菌種屬關(guān)系。試驗(yàn)表明分離到的RA對慶大霉素、鏈霉素、氯霉素、阿米卡星、環(huán)丙沙星、呋喃唑酮為高度敏感，對青霉素... 

【文章來源】：江西農(nóng)業(yè)大學(xué)江西省

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 前言
    1.2 傳播
    1.3 臨床表現(xiàn)
    1.4 病理變化
    1.5 診斷
    1.6 鴨疫里默氏桿菌的鑒定
        1.6.1 細(xì)菌培養(yǎng)形態(tài)
        1.6.2 細(xì)菌形態(tài)
    1.7 生化試驗(yàn)
    1.8 血清學(xué)特性
    1.9 鑒別診斷
    1.10 疫苗
    1.11 治療
    1.12 管理
    1.13 預(yù)防
第二章 試驗(yàn)研究
    試驗(yàn)一 鴨疫里氏桿菌的分離與鑒定
        1.1 材料與方法
            1.1.1 試驗(yàn)材料
            1.1.2 試驗(yàn)儀器
            1.1.3 細(xì)菌菌株
        1.2 細(xì)菌培養(yǎng)
        1.3 鴨疫里氏桿菌分離和鑒定
        1.4 生化試驗(yàn)
            1.4.1 生化試驗(yàn)
        1.5 藥物敏感性試驗(yàn)
        1.6 小結(jié)與討論
    試驗(yàn)二 鴨疫里氏桿菌 16S rRNA 基因的序列擴(kuò)增與分析
        2.1 材料與方法
            2.1.1 試驗(yàn)材料
            2.1.2 試驗(yàn)儀器
        2.2 PCR 優(yōu)化
            2.2.1 溫度梯度
            2.2.2 引物濃度
            2.2.3 鴨疫里氏桿菌的特異性
            2.2.4 敏感性試驗(yàn)
        2.3 16S rRNA 基因的回收和轉(zhuǎn)化
        2.4 限制性內(nèi)切酶
        2.5 小結(jié)與討論
    試驗(yàn)三 鴨疫里氏桿菌的部分 OmpA 基因的擴(kuò)增與分析
        3.1 材料與方法
            3.1.1 試驗(yàn)材料
            3.1.2 試驗(yàn)儀器
        3.2 溫度梯度
        3.3 引物濃度
        3.4 MgCl_2濃度的確定
        3.5 特異性試驗(yàn)
        3.6 鴨疫里氏桿菌的檢測
        3.7 小結(jié)與討論
全文總結(jié)
致謝
Acknowledgement
Contents
Abbreviation
1 summary of dissertation
    1.1 Introduction
    1.2 Transmission
    1.3 Clinical Signs
    1.4 Lesions
    1.5 Diagnosis
    1.6 Identification of RA
        1.6.1 Colonial morphology
        1.6.2 Cellular Morphology
    1.7 Biochemical and other tests
    1.8 Serological Properties
    1.9 Differential Diagnosis
    1.10 Vaccination
    1.11 Treatment
    1.12 Control
    1.13 Prevention
2 Materials and methods
    2.1 Bacterial strains
    2.2 Cultivation
    2.3 RA isolation and identification
    2.4 Biochemical tests
        2.4.1 Biochemical tests
    2.5 Antimicrobial susceptibility test
3 Sequencing of 16S rRNA
    3.1 PCR Optimization
    3.2 Primer concentration
    3.3 The specificity of the R.anatipestifer
    3.4 DNA sensitivity
    3.5 Amplification of 16S rRNA
    3.6 Restriction enzyme
4 Results
5 OmpA detection
    5.1 Temperature Optimization
    5.2 Primers concentration
    5.3 MgCl2determination
    5.4 The specificity of the OmpA
    5.5 Detection the RA
6 Results
7 Discussion
8 Conclusion
References



本文編號：3172578