白細胞介素1（Interleukin 1,IL-1）是參與炎癥和免疫反應(yīng)的內(nèi)源性細胞因子家族之一,在宿主對抗胞內(nèi)微生物（如李斯特菌或布魯氏桿菌）中起著重要作用。其中,白介素1α（IL-1α）、白介素1β（IL-1β）和由IL-1RN編碼的白介素1受體拮抗因子（IL-1Ra）是IL-1家族的重要成員。因此,研究IL-1β與IL-1Ra之間的平衡關(guān)系對維持機體的穩(wěn)態(tài)以及控制相關(guān)疾病發(fā)生發(fā)展提供了一個新的思路。布魯氏菌�。ê喎Q“布病”）是由布魯氏菌引起的人獸共患病,嚴重危害人與動物的健康。動物布病疫苗的使用有助于布病預(yù)防。但使用疫苗后,現(xiàn)有的免疫學(xué)檢測方法無法區(qū)分布病自然感染動物和疫苗免疫動物,導(dǎo)致無法有效撲殺布病患病動物,嚴重阻礙了布病的凈化與防控。本課題組前期工作通過構(gòu)建布魯氏菌強毒、弱毒株感染綿羊白細胞層抑制性消減雜交（SSH）cDNA文庫,篩選到差異表達基因白介素1β（IL-1β）和白介素1受體拮抗因子（IL-1Ra）,并證明布魯氏菌疫苗株與野毒株感染可引起這兩個基因存在明顯的差異表達現(xiàn)象。因此,本研究建立了IL-1β及其拮抗因子的雙熒光ELISA檢測方法,并初步探討其區(qū)分布病自然感... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：99 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
前言
第一篇 文獻綜述
    1 布魯氏菌病
    2 IL-1家族簡介
    3 IL-1和IL-1Ra在正常機體中的生理平衡
    4 IL-1β和IL-1Ra在布魯氏菌病診斷的應(yīng)用
    5 IL-1β和IL-1Ra與其它疾病的關(guān)系
        5.1 IL-1β和IL-1Ra與關(guān)節(jié)炎的關(guān)系
        5.2 IL-1β和IL-1Ra與炎癥性腸病關(guān)系
        5.3 IL-1β和IL-1Ra與肺病的關(guān)系
        5.4 IL-1β和IL-1Ra與腎病的關(guān)系
        5.5 IL-1β和IL-1Ra與肝臟和胰腺疾病的關(guān)系
        5.6 IL-1β和IL-1Ra與癌癥的關(guān)系
        5.7 IL-1β和IL-1Ra與其它疾病的關(guān)系
    6 IL-1β和IL-1Ra的相關(guān)檢測方法
第二篇 研究內(nèi)容
    第1章 IL-1β和IL-1Ra同源保守序列分析與表達
        1.1 材料
            1.1.1 引物
            1.1.2 主要試劑
            1.1.3 主要儀器設(shè)備
            1.1.4 主要材料制備
        1.2 方法
            1.2.1 IL-1β和IL-1Ra保守區(qū)序列的選擇及引物設(shè)計
            1.2.2 IL-1β和IL-1Ra目標(biāo)片段的克隆
            1.2.3 PCR產(chǎn)物純化和IL-1β-2與IL-1Ra-2基因串聯(lián)
            1.2.4 pMCSG9載體質(zhì)粒提取
            1.2.5 pMCSG9-IL-1β-1和pMCSG9-IL-1Ra-1表達菌的構(gòu)建
            1.2.6 pMCSG9-IL-1β-1Ra-2表達菌的構(gòu)建
            1.2.7 重組蛋白表達與純化
        1.3 結(jié)果
            1.3.1 IL-1β和IL-1Ra保守序列的選擇
            1.3.2 IL-1β和IL-1Ra保守區(qū)片段的克隆
            1.3.3 IL-1β與IL-1Ra的基因串聯(lián)
            1.3.4 pMCSG9-IL-1β-1和pMCSG9-IL-1Ra-1轉(zhuǎn)化入DH5α菌液鑒定
            1.3.5 pMCSG9-IL-1β-1Ra-2表達載體的構(gòu)建
            1.3.6 IL-1β-1、IL-1Ra-1和IL-1β-1Ra-2蛋白的表達和純化
        1.4 討論
        1.5 小結(jié)
    第2章 IL-1β和IL-1Ra多克隆抗體的制備與特性分析
        2.1 材料
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
            2.1.3 主要材料
        2.2 方法
            2.2.1 動物免疫
            2.2.2 抗體效價檢測
            2.2.3 多克隆抗體的純化
            2.2.4 抗體鑒定與分析
        2.3 結(jié)果
            2.3.1 多克隆抗體的純化
            2.3.2 多克隆抗體的特異性分析
            2.3.3 多克隆抗體與天然IL-1β和IL-1Ra蛋白結(jié)合
        2.4 討論
        2.5 小結(jié)
    第3章 IL-1β和IL-1Ra雙熒光ELISA檢測方法的建立
        3.1 材料
            3.1.1 主要試劑
            3.1.2 主要儀器
            3.1.3 主要材料
        3.2 方法
            3.2.1 檢測抗體偶聯(lián)熒光微球
            3.2.2 ELISA條件的優(yōu)化
            3.2.3 ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立及回收率分析
            3.2.4 ELISA最低檢測限的確定
            3.2.5 IL-1β和IL-1Ra雙抗體夾心熒光ELISA方法的評價
        3.3 結(jié)果
            3.3.1 檢測多抗偶聯(lián)熒光微球
            3.3.2 捕獲抗體與檢測抗體的最佳工作濃度的確定
            3.3.3 抗原作用時間與檢測抗體作用時間的確定
            3.3.4 最佳封閉時間的確定
            3.3.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線及回收率
            3.3.6 最低檢測限的確定
            3.3.7 雙抗體夾心雙熒光ELISA方法的性能評價
        3.4 討論
        3.5 小結(jié)
    第4章 IL-1β和IL-1Ra雙熒光ELISA檢測方法臨床實際樣品檢測應(yīng)用分析
        4.1 材料
            4.1.1 樣品采集
            4.1.2 主要試劑
            4.1.3 主要儀器
            4.1.4 主要材料
        4.2 方法
            4.2.1 布魯氏菌病相關(guān)羊血樣中IL-1β和IL-1Ra含量分析
            4.2.2 IBD模型小鼠血清樣品中IL-1β和IL-1Ra含量分析
            4.2.3 健康人血清樣中IL-1β和IL-1Ra含量分析
        4.3 結(jié)果
            4.3.1 羊IL-1β和IL-1Ra檢測分析
            4.3.2 IBD模型小鼠IL-1β和IL-1Ra檢測分析
            4.3.3 人血清樣品IL-1β和IL-1Ra檢測
        4.4 討論
        4.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻
導(dǎo)師簡介
作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Brucellosis: a lymphoma-like presentation[J]. Marcel Massoud,Fouad Kerbage,Leony Antoun,Ribal Merhi,Souheil Hallit,Rabih Hallit.  Asian Pacific Journal of Tropical Medicine. 2017(08)
[2]火針對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎大鼠血清白介素-1和腫瘤壞死因子-α的影響[J]. 韓潤霞,楊晶,張?zhí)焐?張衛(wèi)東.  針刺研究. 2012(02)
[3]布魯氏菌病的研究與防控進展[J]. 任洪林,盧士英,周玉,李兆輝,柳增善.  中國畜牧獸醫(yī). 2009(09)
[4]細胞因子檢測方法進展[J]. 姜威,袁穎,袁曉燕.  醫(yī)學(xué)檢驗與臨床. 2007(04)
[5]腫瘤壞死因子α和白細胞介素-1 β mRNA在大鼠肝缺血再灌注損傷時肺組織中的表達及意義[J]. 王紅梅,唐菲,張建龍,卞文安.  中華肝臟病雜志. 2005(05)
[6]IgA腎病和紫癜性腎炎患者單核細胞白細胞介素-1受體拮抗劑的產(chǎn)生能力受其基因多態(tài)性的影響（英文）[J]. 劉志紅,楊俊偉,陳朝紅,龔如軍,黎磊石.  Chinese Medical Journal. 2001(12)

碩士論文
[1]綿羊白介素1β及其受體拮抗因子熒光定量PCR檢測方法的建立與應(yīng)用[D]. 遲丹.吉林大學(xué) 2016
[2]綿羊白介素1β及其受體拮抗因子全長cDNA克隆、分子特性及差異表達分析[D]. 郭興.吉林大學(xué) 2015



本文編號：3172122