金黃色葡萄球菌和鏈球菌是奶牛乳腺炎的重要致病菌,抗生素已經(jīng)無法有效的防治金黃色葡萄球菌和鏈球菌感染。疫苗免疫接種已經(jīng)成為防治金黃色葡萄球菌和鏈球菌感染的有效措施。研究表明,在金黃色葡萄球菌和鏈球菌感染過程中,細(xì)胞免疫應(yīng)答和體液免疫應(yīng)答均發(fā)揮重要作用。因此,有必要研究能夠同時(shí)預(yù)防金黃色葡萄球菌和鏈球菌感染,且誘導(dǎo)細(xì)胞和體液免疫應(yīng)答的多表位疫苗。金黃色葡萄球菌FnBPA和鏈球菌GapC高度保守,具有良好的免疫原性,本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建包含F(xiàn)nBPA和GapC_1-150的CD4⁺T細(xì)胞表位和B細(xì)胞表位的多表位疫苗,并對其免疫原性進(jìn)行了研究。用FnBPA CD4⁺T細(xì)胞表位FT(FnBPA_488-505)和B細(xì)胞表位FB1(FnBPA_352-364)、FB2(FnBPA_763-772)構(gòu)建表位疫苗FTB2、FB1B2和FTB1B2。免疫接種BALB/c小鼠,評價(jià)其免疫效力。結(jié)果,FTB1B2誘導(dǎo)的細(xì)胞因子水平顯著高于其他表位疫苗,但低于FnBPA;誘導(dǎo)的IgG水平除低于FB... 

【文章來源】：黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)黑龍江省

【文章頁數(shù)】：85 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語表
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 引言
    1.2 奶牛乳腺炎疫苗的研究進(jìn)展
        1.2.1 奶牛乳腺炎全菌體疫苗
        1.2.2 奶牛乳腺炎莢膜多糖疫苗
    1.3 金黃色葡萄球菌疫苗的研究進(jìn)展
        1.3.1 金黃色葡萄球菌的致病機(jī)制
        1.3.2 金黃色葡萄球菌亞單位疫苗
        1.3.3 金黃色葡萄球菌FnBPA的研究進(jìn)展
    1.4 鏈球菌疫苗的研究進(jìn)展
        1.4.1 鏈球菌的致病機(jī)制
        1.4.2 鏈球菌亞單位疫苗的研究進(jìn)展
        1.4.3 鏈球菌GapC疫苗的研究進(jìn)展
    1.5 表位疫苗的研究進(jìn)展
    1.6 本研究的目的與意義
2 金黃色葡萄球菌FnBPA多表位疫苗免疫原性研究
    2.1 材料
        2.1.1 菌株和質(zhì)粒
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)動物
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 試劑盒及其他
        2.1.5 主要儀器設(shè)備
    2.2 方法
        2.2.1 多表位疫苗的設(shè)計(jì)
        2.2.2 重組多表位肽原核表達(dá)載體鑒定
        2.2.3 重組多表位肽表達(dá)純化及表位肽合成
        2.2.4 小鼠免疫接種及攻毒
        2.2.5 小鼠脾淋巴細(xì)胞分離
        2.2.6 脾淋巴細(xì)胞增殖檢測
        2.2.7 細(xì)胞因子水平檢測
        2.2.8 間接ELISA法檢測血清IgG
        2.2.9 免疫小鼠器官中細(xì)菌定殖檢測
        2.2.10 統(tǒng)計(jì)分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 重組表位肽質(zhì)粒鑒定
        2.3.2 重組多表位肽表達(dá)及純化結(jié)果
        2.3.3 多表位疫苗誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞增殖
        2.3.4 多表位疫苗誘導(dǎo)的特異性細(xì)胞因子水平
        2.3.5 多表位疫苗誘導(dǎo)的血清IgG水平
        2.3.6 免疫小鼠器官中的細(xì)菌定殖量
    2.4 討論
3 停乳鏈球菌GapC_(1-150) 多表位疫苗免疫原性研究
    3.1 材料
        3.1.1 菌株和質(zhì)粒
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)動物
        3.1.3 主要試劑
        3.1.4 試劑盒及其他
        3.1.5 主要儀器設(shè)備
    3.2 方法
        3.2.1 多表位疫苗的設(shè)計(jì)
        3.2.2 重組多表位肽原核表達(dá)載體鑒定
        3.2.3 重組多表位肽表達(dá)純化及表位肽合成
        3.2.4 小鼠免疫接種及攻毒
        3.2.5 小鼠脾淋巴細(xì)胞分離
        3.2.6 脾淋巴細(xì)胞增殖檢測
        3.2.7 細(xì)胞因子水平檢測
        3.2.8 間接ELISA法檢測血清IgG水平
        3.2.9 免疫小鼠器官中的細(xì)菌定殖檢測
        3.2.10 統(tǒng)計(jì)分析
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 重組多表位肽質(zhì)粒鑒定
        3.3.2 重組多表位肽表達(dá)及純化結(jié)果
        3.3.3 多表位疫苗誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞增殖
        3.3.4 多表位疫苗誘導(dǎo)的特異性細(xì)胞因子水平
        3.3.5 多表位疫苗誘導(dǎo)的血清IgG水平
        3.3.6 免疫小鼠器官中的細(xì)菌定殖量
    3.4 討論
4 FnBPA和 GapC_(1-150) 多表位疫苗免疫原性研究
    4.1 材料
        4.1.1 菌株和質(zhì)粒
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)動物
        4.1.3 主要試劑
        4.1.4 試劑盒及其他
        4.1.5 主要儀器設(shè)備
    4.2 方法
        4.2.1 多表位疫苗的設(shè)計(jì)
        4.2.2 重組多表位肽原核表達(dá)載體鑒定
        4.2.3 重組多表位的表達(dá)純化及多肽的合成
        4.2.4 小鼠免疫接種及攻毒
        4.2.5 小鼠的脾淋巴細(xì)胞分離
        4.2.6 脾淋巴細(xì)胞增殖檢測
        4.2.7 細(xì)胞因子水平檢測
        4.2.8 間接ELISA法檢測血清IgG
        4.2.9 免疫小鼠器官中細(xì)菌定殖量檢測
        4.2.10 統(tǒng)計(jì)分析
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 重組多表位肽質(zhì)粒鑒定
        4.3.2 重組多表位肽表達(dá)及純化結(jié)果
        4.3.3 多表位疫苗誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞增殖
        4.3.4 多表位疫苗誘導(dǎo)的特異性細(xì)胞因子水平
        4.3.5 多表位疫苗誘導(dǎo)的血清IgG水平
        4.3.6 免疫小鼠器官中的細(xì)菌定殖量
    4.4 討論
5 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄
個(gè)人簡歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]奶牛乳房炎疫苗研究進(jìn)展[J]. 劉龍海,李新圃,楊峰,羅金印,王旭榮,張哲,羅增輝,李宏勝.  動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2016(01)
[2]金黃色葡萄球菌黏附素ClfA,FnBPA-A,FnBPA-BCD聯(lián)合免疫的免疫生物學(xué)特性[J]. 姜慧嬌,蘇艷,申煜.  微生物學(xué)報(bào). 2015(10)
[3]長春地區(qū)奶牛乳腺炎主要致病菌分離鑒定及藥敏試驗(yàn)[J]. 劉春杰,楊麗華,張春,劉靚,王貴,李景思.  南方農(nóng)業(yè). 2014(18)
[4]金黃色葡萄球菌凝集因子A的免疫原性[J]. 馮昊,劉樂鋒,遲佳琦,王寧,李閏婷,佟春玉,馬金柱,朱戰(zhàn)波,崔玉東.  生物工程學(xué)報(bào). 2009(08)
[5]接頭序列及其在融合蛋白構(gòu)建中的應(yīng)用[J]. 韓小艷,趙娜,王永祥.  河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2007(03)

碩士論文
[1]金葡菌FnbpA蛋白CD4+T細(xì)胞表位誘導(dǎo)的Th細(xì)胞類型及其作用[D]. 王歆桐.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué) 2017
[2]無乳鏈球菌、停乳鏈球菌、乳房鏈球菌GapC蛋白的表達(dá)與免疫原性研究[D]. 車車.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué) 2009



本文編號：3168363