犬瘟熱（Canine distemper，CD）是由副粘病毒科麻疹病毒屬（Morbillivirus）的犬瘟熱病毒（Canine distemper virus，CDV）引起的一種急性、高度接觸傳染性疾病。該病毒可致多種動(dòng)物發(fā)病，其病死率為30%⁸0%，但雪貂高達(dá)100%，素有“毀滅性傳染病”之稱。目前，CDV的自然感染宿主范圍不斷擴(kuò)大，危害性也越來越大。CDV可在犬或貂的肺和腹腔巨噬細(xì)胞、腎細(xì)胞、犢牛的腎細(xì)胞和雞胚成纖維細(xì)胞（CEF）等多種組織細(xì)胞上增殖。其中以犬肺巨噬細(xì)胞最為易感，可出現(xiàn)CDV典型的葡萄串狀細(xì)胞病變（CPE），但該細(xì)胞分離困難，且容易污染。CEF對(duì)營養(yǎng)條件要求低，生長穩(wěn)定，并對(duì)CDV敏感，細(xì)胞病變典型、易觀察，但CDV在CEF上初次分離很困難，需在雞胚絨毛尿囊膜（CAM）上經(jīng)多次傳代才能適應(yīng)CEF。近年來，研究發(fā)現(xiàn)CDV具有淋巴細(xì)胞信號(hào)刺激因子（SLAM），而Vero細(xì)胞可以表達(dá)SLAM受體，因此，Vero細(xì)胞成為了CDV分離培養(yǎng)的首選細(xì)胞。本研究中，在將魯北獸醫(yī)診斷中心RT-PCR檢測呈陽性的水貂CD病料進(jìn)行常規(guī)處理的基礎(chǔ)上，分別接種CEF、... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
引言
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 犬瘟熱病毒病原學(xué)特征
        1.1.1 犬瘟熱病毒的形態(tài)特征及理化特性
        1.1.2 犬瘟熱病毒的抗原性與培養(yǎng)特性
        1.1.3 犬瘟熱病毒病毒的組織嗜性與致病性
    1.2 犬瘟熱病毒分子生物學(xué)特征
        1.2.1 犬瘟熱病毒基因組的結(jié)構(gòu)特征
        1.2.2 犬瘟熱病毒基因組編碼蛋白及其功能
    1.3 犬瘟熱病毒的實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)
        1.3.1 病原學(xué)檢測技術(shù)
        1.3.2 血清學(xué)檢測技術(shù)
        1.3.3 分子生物學(xué)檢測技術(shù)
    1.4 本研究的目的與意義
第2章 水貂犬瘟熱病毒的分離鑒定
    2.1 材料
        2.1.1 病料來源
        2.1.2 細(xì)胞和參考毒株
        2.1.3 主要試劑和器材
        2.1.4 主要溶液的配制
    2.2 方法
        2.2.1 病料的采集與處理
        2.2.2 病料 RT-PCR 檢測 CDV
        2.2.3 病料 PCR 檢測水貂細(xì)小病毒（MEV 和 ADMV）
        2.2.4 病毒分離培養(yǎng)
        2.2.5 分離毒鑒定
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 病料 RT-PCR 檢測 CDV 及 PCR 的特異性試驗(yàn)結(jié)果
        2.3.2 病料 PCR 檢測水貂細(xì)小病毒（MEV 和 ADMV）結(jié)果
        2.3.3 分離毒 CDV 在不同細(xì)胞上的病變特征
        2.3.4 分離毒 CDV 在不同細(xì)胞上的病毒效力
        2.3.5 分離毒 CDV 在 Vero 細(xì)胞上的中和效價(jià)
        2.3.6 CDV 分離毒 RT-PCR 鑒定結(jié)果
        2.3.7 分離毒 RT-PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物測序鑒定結(jié)果
        2.3.8 分離毒間接免疫熒光鑒定結(jié)果
        2.3.9 包涵體檢查結(jié)果
    2.4 討論
        2.4.1 病毒檢測引物的設(shè)計(jì)
        2.4.2 CDV 分離毒細(xì)胞培養(yǎng)條件的優(yōu)化
        2.4.3 CDV 分離毒鑒定方法的選擇
    2.5 小結(jié)
第3章 水貂犬瘟熱病毒熒光定量 RT-PCR 檢測方法的建立與應(yīng)用
    3.1 材料
        3.1.1 毒株
        3.1.2 主要試劑和器材
        3.1.3 主要溶液的配制
    3.2 方法
        3.2.1 引物的設(shè)計(jì)與合成
        3.2.2 樣品處理與核酸提取
        3.2.3 目的基因的擴(kuò)增與標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立及敏感性檢測
        3.2.5 特異性試驗(yàn)
        3.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 RT-PCR 擴(kuò)增及質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立及敏感性檢測
        3.3.3 特異性試驗(yàn)
        3.3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第4章 水貂犬瘟熱病毒精制卵黃抗體（IGY）的制備及動(dòng)物保護(hù)試驗(yàn)
    4.1 材料
        4.1.1 毒株
        4.1.2 抗原制備
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        4.1.4 主要試劑和器材
        4.1.5 主要溶液的配制
    4.2 方法
        4.2.1 蛋雞的免疫
        4.2.2 雞蛋與血清的收集及處理
        4.2.3 卵黃抗體提取制備
        4.2.4 卵黃抗體和血清抗體效力測定
        4.2.5 SDS-PAGE 電泳檢測 IgY
        4.2.6 抗水貂 CDV 病毒 IgY 體外病毒中和試驗(yàn)
        4.2.7 IgY 免疫動(dòng)物保護(hù)性試驗(yàn)
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 AGP 法測定 CDV IgG 和 IgY 的抗體水平
        4.3.2 間接 ELISA 法測定 CDV IgG 和 IgY 的抗體水平
        4.3.3 SDS-PAGE 電泳檢測卵黃抗體
        4.3.4 IgY 體外病毒中和試驗(yàn)
        4.3.5 IgY 免疫動(dòng)物治療效果
    4.4 討論
        4.4.1 免疫原選擇
        4.4.2 免疫程序設(shè)計(jì)
        4.4.3 卵黃抗體與血清抗體消長規(guī)律
        4.4.4 AGP 檢測方法的設(shè)立
        4.4.5 IgY 抽提方法的選擇
    4.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
導(dǎo)師簡介
作者簡介
在學(xué)期間所取得的科研成果
致謝



本文編號(hào)：3166543