布魯菌�。˙rucellosis）是由革蘭氏陰性、胞內(nèi)寄生菌布魯菌（Brucella）引起的一種人獸共患傳染病，主要引起患病動(dòng)物不孕、流產(chǎn)和死胎,對(duì)動(dòng)物養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，并且嚴(yán)重威脅到了人類的生命健康。多年來，學(xué)者們對(duì)布魯菌外膜蛋白的研究發(fā)現(xiàn)，其主要外膜蛋白具有免疫原性和抗原保護(hù)性。布魯菌外膜蛋白Omp2a屬于第二組外膜蛋白，是菌體表面一種孔道蛋白，而第二組外膜蛋白構(gòu)成了布魯菌細(xì)胞的滲透系統(tǒng)，可以引起機(jī)體的體液和細(xì)胞免疫反應(yīng)。為了研究出一種新型的能夠快速準(zhǔn)確檢測(cè)布魯菌病的診斷方法，本實(shí)驗(yàn)通過表達(dá)、純化布魯菌外膜蛋白Omp2a、免疫小鼠、細(xì)胞融合和篩選等最終獲得了能夠分泌其特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞株。1.通過將已經(jīng)構(gòu)建成功的帶有GST標(biāo)簽的pGEX-4T-1原核表達(dá)載體連接、轉(zhuǎn)化后表達(dá)布魯菌外膜蛋白Omp2a融合蛋白，使用了兩種方法對(duì)融合蛋白進(jìn)行了純化。2.用純化的布魯菌外膜蛋白Omp2a按照一定免疫程序定期免疫Balb/c小鼠，得到能夠產(chǎn)生抗體的免疫脾細(xì)胞。間接ELISA方法檢測(cè)免疫小鼠體內(nèi)血清抗體效價(jià)，達(dá)到最低標(biāo)準(zhǔn)1∶1×105時(shí)進(jìn)行細(xì)胞融合。3.通過細(xì)胞融合、篩選得到3株能... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：37 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 布魯菌及其外膜蛋白研究進(jìn)展
    1.1 布魯菌病
    1.2 布魯菌外膜蛋白
        1.2.1 第一組外膜蛋白
        1.2.2 第二組外膜蛋白
        1.2.3 第三組外膜蛋白
    1.3 布魯菌病診斷及檢測(cè)方法
        1.3.1 細(xì)菌學(xué)診斷
        1.3.2 血清學(xué)診斷方法
        1.3.3 分子學(xué)方法
    本研究的目的和意義
第二章 布魯菌外膜蛋白 Omp2a 的表達(dá)及純化
    2.1 材料與方法
        2.1.1 材料及儀器設(shè)備
        2.1.2 方法
            2.1.2.1 布魯菌外膜蛋白 Omp2a 的表達(dá)
            2.1.2.2 布魯菌外膜蛋白 Omp2a 的純化
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 布魯菌外膜蛋白 Omp2a 的表達(dá)及可溶性鑒定
        2.2.2 布魯菌外膜蛋白 Omp2a 的純化
            2.2.2.1 電洗脫法純化
            2.2.2.2 GST 層析柱純化
    2.3 討論
第三章 分泌抗布魯菌外膜蛋白 Omp2a 特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞株的建立
    3.1 材料和方法
        3.1.1 主要材料
        3.1.2 雜交瘤細(xì)胞株的建立
            3.1.2.1 所需試劑配制
            3.1.2.2 免疫小鼠
            3.1.2.3 間接 ELISA 法檢測(cè)小鼠血清抗體效價(jià)
            3.1.2.4 SP2/0 骨髓瘤細(xì)胞的準(zhǔn)備
            3.1.2.5 飼養(yǎng)層細(xì)胞的制備
            3.1.2.6 小鼠免疫脾細(xì)胞的制備
            3.1.2.7 細(xì)胞融合
            3.1.2.8 雜交瘤細(xì)胞的篩選
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 小鼠免疫及血清抗體效價(jià)檢測(cè)
        3.2.2 細(xì)胞融合
        3.2.3 雜交瘤細(xì)胞的篩選
    3.3 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
作者簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]動(dòng)物布魯氏菌快速檢測(cè)方法的研究[D]. 李建云.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012

碩士論文
[1]布魯氏菌主要外膜蛋白基因的克隆、表達(dá)及蛋白純化[D]. 楊磊.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2013



本文編號(hào)：3160992