布魯菌�。˙rucellosis）是由革蘭氏陰性、胞內寄生菌布魯菌（Brucella）引起的一種人獸共患傳染病，主要引起患病動物不孕、流產和死胎,對動物養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經濟損失，并且嚴重威脅到了人類的生命健康。多年來，學者們對布魯菌外膜蛋白的研究發(fā)現(xiàn)，其主要外膜蛋白具有免疫原性和抗原保護性。布魯菌外膜蛋白Omp2a屬于第二組外膜蛋白，是菌體表面一種孔道蛋白，而第二組外膜蛋白構成了布魯菌細胞的滲透系統(tǒng)，可以引起機體的體液和細胞免疫反應。為了研究出一種新型的能夠快速準確檢測布魯菌病的診斷方法，本實驗通過表達、純化布魯菌外膜蛋白Omp2a、免疫小鼠、細胞融合和篩選等最終獲得了能夠分泌其特異性抗體的雜交瘤細胞株。1.通過將已經構建成功的帶有GST標簽的pGEX-4T-1原核表達載體連接、轉化后表達布魯菌外膜蛋白Omp2a融合蛋白，使用了兩種方法對融合蛋白進行了純化。2.用純化的布魯菌外膜蛋白Omp2a按照一定免疫程序定期免疫Balb/c小鼠，得到能夠產生抗體的免疫脾細胞。間接ELISA方法檢測免疫小鼠體內血清抗體效價，達到最低標準1∶1×105時進行細胞融合。3.通過細胞融合、篩選得到3株能... 

【文章來源】：西北農林科技大學陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：37 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 布魯菌及其外膜蛋白研究進展
    1.1 布魯菌病
    1.2 布魯菌外膜蛋白
        1.2.1 第一組外膜蛋白
        1.2.2 第二組外膜蛋白
        1.2.3 第三組外膜蛋白
    1.3 布魯菌病診斷及檢測方法
        1.3.1 細菌學診斷
        1.3.2 血清學診斷方法
        1.3.3 分子學方法
    本研究的目的和意義
第二章 布魯菌外膜蛋白 Omp2a 的表達及純化
    2.1 材料與方法
        2.1.1 材料及儀器設備
        2.1.2 方法
            2.1.2.1 布魯菌外膜蛋白 Omp2a 的表達
            2.1.2.2 布魯菌外膜蛋白 Omp2a 的純化
    2.2 結果與分析
        2.2.1 布魯菌外膜蛋白 Omp2a 的表達及可溶性鑒定
        2.2.2 布魯菌外膜蛋白 Omp2a 的純化
            2.2.2.1 電洗脫法純化
            2.2.2.2 GST 層析柱純化
    2.3 討論
第三章 分泌抗布魯菌外膜蛋白 Omp2a 特異性抗體的雜交瘤細胞株的建立
    3.1 材料和方法
        3.1.1 主要材料
        3.1.2 雜交瘤細胞株的建立
            3.1.2.1 所需試劑配制
            3.1.2.2 免疫小鼠
            3.1.2.3 間接 ELISA 法檢測小鼠血清抗體效價
            3.1.2.4 SP2/0 骨髓瘤細胞的準備
            3.1.2.5 飼養(yǎng)層細胞的制備
            3.1.2.6 小鼠免疫脾細胞的制備
            3.1.2.7 細胞融合
            3.1.2.8 雜交瘤細胞的篩選
    3.2 結果與分析
        3.2.1 小鼠免疫及血清抗體效價檢測
        3.2.2 細胞融合
        3.2.3 雜交瘤細胞的篩選
    3.3 討論
結論
參考文獻
附錄
致謝
作者簡介


【參考文獻】：
期刊論文
[1]布魯氏菌病的流行特點及防控[J]. 盧賢建.  中國畜禽種業(yè). 2013(08)
[2]Taqman MGB探針實時熒光定量PCR檢測布魯菌病的研究[J]. 劉艷紅,王清.  現(xiàn)代預防醫(yī)學. 2013(07)
[3]多重熒光定量PCR方法鑒定布魯氏菌屬及牛羊種布魯氏菌研究[J]. 劉志國,羅成旺,張利,姜海,趙鴻雁,樸東日,田國忠,崔步云.  中國人獸共患病學報. 2012(09)
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[5]布魯氏菌的致病機制與細胞免疫機制研究進展[J]. 董炳梅,王金良,唐娜,苗立中,沈志強.  中國人獸共患病學報. 2012(06)
[6]布魯菌Cycling探針熒光定量PCR檢測方法的建立[J]. 許鄒亮,南文龍,陸明哲,周潔,譚鵬飛,陳義平,毛開榮.  中國獸醫(yī)雜志. 2012(02)
[7]布魯氏菌外膜蛋白的研究進展[J]. 胡劍飛,崔步云,關平原,劉志國.  疾病監(jiān)測. 2010(05)
[8]布魯菌病的實驗室檢測方法[J]. 辛梅平,林瑞生,王君.  中國醫(yī)藥指南. 2010(14)
[9]膠體金免疫層析法在布魯氏菌病監(jiān)測地區(qū)的現(xiàn)場應用[J]. 邵豐堯,朱匡紀,朱明東.  疾病監(jiān)測. 2009(10)
[10]多重PCR特異檢測布魯氏菌方法的建立[J]. 杜昕穎,陳澤良,王玉飛,喬鳳,趙瑾,苑錫銅,黃留玉.  解放軍預防醫(yī)學雜志. 2008(05)

博士論文
[1]動物布魯氏菌快速檢測方法的研究[D]. 李建云.內蒙古農業(yè)大學 2012

碩士論文
[1]布魯氏菌主要外膜蛋白基因的克隆、表達及蛋白純化[D]. 楊磊.西北農林科技大學 2013



本文編號：3160992