目的：利用噬菌體展示隨機(jī)環(huán)七肽文庫進(jìn)行篩選獲得結(jié)核分枝桿菌MTB特異性結(jié)合肽，并初步鑒定其與MTB的結(jié)合能力；將篩選獲得的結(jié)合肽與納米磁珠和熒光量子點(diǎn)偶聯(lián)，建立免疫磁珠熒光量子點(diǎn)技術(shù)檢測MTB的新方法。方法：噬菌體篩選以MTB標(biāo)準(zhǔn)株H37Rv滅活菌體為靶分子，按吸附、洗脫、擴(kuò)增的生物淘選（簡稱淘選）過程對噬菌體展示隨機(jī)環(huán)七肽文庫進(jìn)行篩選，并于第2至第4輪的篩選中加入BCG滅活菌體進(jìn)行反篩，4輪淘選后，從滴度測定平板上各個(gè)方位挑取H37Rv和BCG結(jié)合單噬菌體各28和27個(gè)進(jìn)行擴(kuò)增純化，提取單鏈DNA進(jìn)行測序，間接ELISA法檢測不同單噬菌體與H3Rv、BCG和3種非分枝桿菌（銅綠假單胞菌、大腸桿菌和白色念珠菌）的結(jié)合活性，鑒定出陽性克隆。將陽性單噬菌體所表達(dá)的展示肽體外合成并標(biāo)記熒光，熒光顯微鏡觀察其與19種分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)株的結(jié)合活性；流式細(xì)胞儀檢測四種合成環(huán)肽與H37Rv和BCG的結(jié)合活性。利用濕化學(xué)方法制備納米磁珠和熒光量子點(diǎn)，將本室前期篩選獲得的MTB特異性結(jié)合線性七肽H8以及購買的抗MTB多克隆抗體（Pab）偶聯(lián)納米磁珠，獲得2種免疫磁珠MNP-H8和MNP-Pab，將H8、抗M... 

【文章來源】：蘇州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
引言
第一部分 結(jié)核分枝桿菌菌體結(jié)合肽的篩選
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
第二部分 免疫磁珠熒光量子點(diǎn)技術(shù)檢測結(jié)核分枝桿菌的方法學(xué)研究和初步評估
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述 納米技術(shù)在結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室診斷和治療中的研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間本人出版或公開發(fā)表的論著、論文及申請專利
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致謝


【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號：3160138