近年來(lái),隨著養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展,與之伴隨的疾病也越來(lái)越復(fù)雜。豬細(xì)小病毒（porcine parvovirus,PPV）和豬圓環(huán)病毒2型（porcine circovirus type 2,PCV2）在臨床養(yǎng)殖過(guò)程中常出現(xiàn)混合感染,且PCV2感染后會(huì)使豬產(chǎn)生免疫抑制,容易激發(fā)或并發(fā)其他傳染病原,副豬嗜血桿菌（Haemophilus parasuis,Hps）是一種典型的“機(jī)會(huì)主義”病原,常作為繼發(fā)病原伴隨PCV2導(dǎo)致混合感染。準(zhǔn)確而快速的診斷這幾種病原,從而提供針對(duì)性的治療,對(duì)養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展意義重大。熒光定量PCR檢測(cè)技術(shù)具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、快速、簡(jiǎn)便、能定量等優(yōu)點(diǎn),廣泛應(yīng)用于病原診斷。本研究擬建立一種三重實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)方法,并結(jié)合熔解曲線分析,實(shí)現(xiàn)對(duì)PPV、PCV2和Hps單獨(dú)或混合感染的快速診斷。為此,做了以下研究:（一）分別建立了PPV,PCV2,Hps的熒光定量PCR檢測(cè)方法。根據(jù)PPV的VP2基因、PCV2的cap基因和Hps的infB基因保守區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物,并將擴(kuò)增片段克隆載體后構(gòu)建質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品。以不同稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)品為模板進(jìn)行SYBR GreenΙ熒光定量PCR擴(kuò)增并制... 

【文章來(lái)源】：河南科技學(xué)院河南省

【文章頁(yè)數(shù)】：89 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
縮略語(yǔ)表
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 前言
    2 豬細(xì)小病毒簡(jiǎn)介及檢測(cè)方法研究進(jìn)展
        2.1 病原學(xué)特點(diǎn)
        2.2 流行病學(xué)特點(diǎn)
        2.3 檢測(cè)方法
    3 豬圓環(huán)病毒Ⅱ型及其診斷方法研究進(jìn)展
        3.1 病原學(xué)特點(diǎn)
        3.2 流行病學(xué)特點(diǎn)
        3.3 診斷方法
    4 副豬嗜血桿菌病檢測(cè)方法研究進(jìn)展
        4.1 病原學(xué)特點(diǎn)
        4.2 流行病學(xué)特點(diǎn)
        4.3 檢測(cè)方法
第二章 豬細(xì)小病毒、豬圓環(huán)病毒2 型和副豬嗜血桿菌SYBR GreenΙ實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結(jié)果
        2.1 陽(yáng)性質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2 反應(yīng)條件優(yōu)化結(jié)果
        2.3 熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
        2.4 擴(kuò)增產(chǎn)物熔解曲線分析
        2.5 特異性檢測(cè)
        2.6 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果
        2.7 敏感性檢驗(yàn)
        2.8 病料檢測(cè)
    3 討論
    4 小結(jié)
第三章 豬細(xì)小病毒與豬圓環(huán)病毒Ⅱ型雙重SYBR Green Ⅰ實(shí)時(shí)PCR檢測(cè)方法的建立
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結(jié)果
        2.1 體系優(yōu)化結(jié)果
        2.2 熔解曲線分析
        2.3 特異性檢測(cè)
        2.4 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果
        2.5 敏感性檢驗(yàn)
        2.6 臨床樣品檢測(cè)
    3 討論
    4 小結(jié)
第四章 豬細(xì)小病毒與副豬嗜血桿菌雙重SYBR Green Ⅰ實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結(jié)果
        2.1 體系優(yōu)化結(jié)果
        2.2 熔解曲線分析
        2.3 特異性檢測(cè)
        2.4 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果
        2.5 敏感性檢驗(yàn)
        2.6 臨床樣品檢測(cè)
    3 討論
    4 小結(jié)
第五章 豬圓環(huán)病毒Ⅱ型與副豬嗜血桿菌雙重SYBR Green Ⅰ實(shí)時(shí)PCR檢測(cè)方法的建立
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結(jié)果
        2.1 體系優(yōu)化結(jié)果
        2.2 熔解曲線分析
        2.3 特異性檢測(cè)
        2.4 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果
        2.5 敏感性檢驗(yàn)
        2.6 臨床樣品檢測(cè)
    3 討論
    4 小結(jié)
第六章 豬細(xì)小病毒、豬圓環(huán)病毒Ⅱ型和副豬嗜血桿菌三重SYBR Green Ⅰ實(shí)時(shí)PCR檢測(cè)方法的建立
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結(jié)果
        2.1 體系優(yōu)化結(jié)果
        2.2 熔解曲線分析
        2.3 特異性檢測(cè)
        2.4 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果
        2.5 敏感性檢驗(yàn)
        2.6 臨床樣品檢測(cè)
    3 討論
    4 小結(jié)
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
附件
    附件（A）
    附件（B）
    附件（C）
    附件（D）
致謝
導(dǎo)師簡(jiǎn)介
作者簡(jiǎn)介
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]副豬嗜血桿菌群體基因組測(cè)序、分子分型和耐藥性研究[D]. 馬麗娜.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2017
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碩士論文
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[3]豬細(xì)小病毒與副豬嗜血桿菌基因芯片同步檢測(cè)技術(shù)的研究[D]. 趙迪.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
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[5]豬圓環(huán)病毒2型Cap基因工程疫苗的研制[D]. 李芳.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[6]豬細(xì)小病毒的分離鑒定及NS1/VP2基因遺傳進(jìn)化分析[D]. 何學(xué)峰.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[7]豬圓環(huán)病毒2型和副豬嗜血桿菌二聯(lián)滅活疫苗的研制與免疫效力研究[D]. 徐蓉.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[8]豬圓環(huán)病毒2型和副豬嗜血桿菌4型混合感染致病性研究[D]. 劉淑清.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[9]幾種主要的豬病毒性疾病多重SYBR GreenⅠ熒光定量PCR檢測(cè)方法的研究[D]. 韓志濤.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[10]豬圓環(huán)病毒2型與副豬嗜血桿菌混合感染昆明小鼠的病理學(xué)研究[D]. 潘蕎.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010



本文編號(hào)：3159787