霉菌毒素能夠降低飼料的飼喂價(jià)值,影響畜禽的生產(chǎn)性能,對(duì)動(dòng)物組織機(jī)能、健康產(chǎn)生不利影響,甚至導(dǎo)致畜禽死亡。黃曲霉毒素B1（AFB1）、玉米赤霉烯酮（ZEN）、嘔吐毒素（DON）是被大眾廣泛研究的三種霉菌毒素,也是污染最為普遍的三種毒素。霉菌毒素可以不同的劑量對(duì)動(dòng)物和人的健康造成不同程度的威脅。因此,對(duì)于霉菌毒素以及產(chǎn)毒霉菌的檢測(cè)顯得至關(guān)重要。目前常用的霉菌毒素檢測(cè)方法有薄層層析、液相色譜、免疫化學(xué)分析等幾種方法,主要基于霉菌毒素的理化性質(zhì),無(wú)法檢出己被產(chǎn)毒真菌污染但尚未產(chǎn)毒的高風(fēng)險(xiǎn)樣品。多重PCR檢測(cè)方法,可在單一泳道反應(yīng)體系中同時(shí)檢測(cè)多個(gè)DNA模板或同一模板的不同區(qū)域,具有快捷、高效、低成本等優(yōu)點(diǎn),被廣泛應(yīng)用于有害微生物檢測(cè)。本課題調(diào)研了我省2012年秋季玉米中黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素的污染情況,對(duì)三類(lèi)霉菌毒素與玉米籽粒水分含量、破損率、霉變率之間的相關(guān)性進(jìn)行了分析。以產(chǎn)毒真菌黃曲霉、鐮刀菌的基因組DNA為模板,根據(jù)AFB1、ZEN、DON三種毒素生物合成中關(guān)鍵基因的序列設(shè)計(jì)引物,構(gòu)建了能夠從樣品中快速靈敏檢測(cè)潛藏性產(chǎn)毒真菌的多重PCR檢測(cè)體系。1)課題從我省各地采集了8... 

【文章來(lái)源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：62 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
縮略詞
中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 霉菌毒素
        1.1.1 霉菌毒素的發(fā)生及分布
        1.1.2 常見(jiàn)的霉菌毒素及其生理毒性
        1.1.3 霉菌毒素的合成與代謝
    1.2 常用的霉菌毒素檢測(cè)方法
        1.2.1 生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)
        1.2.2 物理化學(xué)檢測(cè)方法
        1.2.3 免疫學(xué)檢測(cè)方法
    1.3 PCR法檢測(cè)霉菌毒素的研究進(jìn)展
    1.4 mPCR法檢測(cè)產(chǎn)毒霉菌研究進(jìn)展
    1.5 選題的目的與意義
2 材料與方法
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 樣品
        2.1.2 試驗(yàn)主要的試劑
        2.1.3 試驗(yàn)主要的儀器及耗材
        2.1.4 供試菌株
        2.1.5 培養(yǎng)基
        2.1.6 質(zhì)粒及受體菌
    2.2 玉米霉菌毒素的檢測(cè)
        2.2.1 黃曲霉毒素B1含量的測(cè)定原理
        2.2.2 玉米赤霉烯酮含量的測(cè)定原理
        2.2.3 嘔吐毒素含量的測(cè)定原理
        2.2.4 玉米中各毒素檢出和超標(biāo)判定標(biāo)準(zhǔn)
    2.3 玉米中自由水、吸附水、總水含量測(cè)定
    2.4 玉米籽粒殘破率、霉變率測(cè)定
    2.5 多重PCR法檢測(cè)玉米中產(chǎn)毒霉菌的研究
        2.5.1 真菌DNA的提取
        2.5.2 目的基因引物設(shè)計(jì)與擴(kuò)增
        2.5.3 單基因的PCR擴(kuò)增特異性和靈敏性分析
        2.5.4 PCR目的產(chǎn)物檢測(cè)
        2.5.5 基因片段PCR產(chǎn)物的回收純化
        2.5.6 目的基因的連接、轉(zhuǎn)化及鑒定
        2.5.7 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞（E.coli DH5α）的制備
        2.5.8 普通PCR擴(kuò)增體系檢測(cè)玉米中產(chǎn)毒真菌的特異性分析
        2.5.9 多重PCR體系的特異性和靈敏性分析
    2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 新玉米中各種霉菌毒素的污染狀況及各毒素相關(guān)性的研究
        3.1.1 玉米中各種霉菌毒素的污染狀況
        3.1.2 各種毒素相關(guān)性的研究
    3.2 玉米中自由水、吸附水、總水含量及與霉菌毒素之間相關(guān)性的研究
        3.2.1 玉米中自由水、吸附水以及總水分含量分析
        3.2.2 玉米中自由水、吸附水、總水含量及與霉菌毒素之間相關(guān)性的研究
    3.3 玉米籽粒殘破率、霉變率及與霉菌毒素、水分含量相關(guān)性的研究
        3.3.1 玉米籽粒殘破率、霉變率分析
        3.3.2 玉米籽粒殘破率、霉變率及與霉菌毒素、水分含量相關(guān)性的分析
    3.4 多重PCR法檢測(cè)玉米中產(chǎn)毒霉菌的研究
        3.4.1 普通PCR擴(kuò)增產(chǎn)毒真菌DNA特異性研究
        3.4.2 普通PCR擴(kuò)增產(chǎn)毒真菌DNA靈敏性研究
        3.4.3 普通PCR檢測(cè)玉米樣品中產(chǎn)毒菌株的研究
        3.4.4 多重PCR法檢測(cè)玉米樣品中產(chǎn)毒真菌的研究
4 討論
    4.1 新玉米中各種霉菌毒素的污染狀況及各毒素相關(guān)性的研究
        4.1.1 新玉米中各種霉菌毒素的含量
        4.1.2 各種霉菌毒素含量的相關(guān)性
    4.2 玉米中自由水、吸附水、總水含量及與霉菌毒素之間相關(guān)性的研究
    4.3 玉米籽粒殘破率、霉變率及與霉菌毒素、水分含量相關(guān)性的研究
    4.4 多重PCR法檢測(cè)玉米中產(chǎn)毒霉菌的研究
5 結(jié)論與研究展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 課題創(chuàng)新點(diǎn)
    5.3 研究展望
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3159206