引起奶牛乳腺炎的原因復雜多樣,金黃色葡萄球菌是其中重要的病原之一。目前生產上針對金黃色葡萄球菌引發(fā)的奶牛乳腺炎的防治有抗生素、中草藥以及滅活疫苗等,但是抗生素的過度使用會產生耐藥性甚至“抗性奶”,危害公共衛(wèi)生和人類身體健康,而中草藥治療用量大,成本高,滅活疫苗等預防效果也不理想。隨著分子生物學和免疫學的發(fā)展,抗體制劑受到越來越多研究者的親睞,尤其是小分子單鏈抗體,不僅保留了“Y”形抗體完整的抗原結合位點,且具有分子量小,免疫原性低,組織穿透能力強等優(yōu)點,也備受大家關注。為探尋治療奶牛乳腺炎的抗生素替代性生物制劑,本研究將其原核表達產物已顯示具有一定治療效果的8個針對牛源金黃色葡萄球菌單鏈抗體（scFv）的編碼基因插入到pcDNA3.1（+）,構建真核表達質粒pcDNA3.1-scFv。首先驗證單鏈抗體真核質粒的表達特性,將其注入小鼠乳腺內,經Western blot驗證真核質粒從第1 d開始表達,第5 d達到表達高峰,在此基礎上繼續(xù)研究真核表達scFv對小鼠乳腺炎的治療作用。具體方法是將混合的真核表達質粒經第四對乳腺導管注入到處于泌乳期的乳腺炎模型小鼠的乳腺中,以通過scFv在小鼠乳腺... 

【文章來源】：上海交通大學上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數】：80 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
符號說明
第一章 緒論
    1.1 奶牛乳腺炎的感染及發(fā)病機理
        1.1.1 奶牛乳腺炎的危害
        1.1.2 奶牛乳腺炎的病原
        1.1.3 奶牛乳腺炎的發(fā)病機理
    1.2 奶牛乳腺炎的診斷研究現(xiàn)狀
    1.3 奶牛乳腺炎的防治研究進展
        1.3.1 抗生素治療
        1.3.2 中草藥治療
        1.3.3 抗微生物制劑治療
        1.3.4 加強日常管理
        1.3.5 目前防治奶牛乳腺炎方法的一些弊端
    1.4 單鏈抗體的研究進展
        1.4.1 scFv介紹
        1.4.2 scFv的噬菌體展示
        1.4.3 scFv的真核表達
        1.4.4 scFv的應用
    1.5 本實驗室研究基礎
    1.6 本論文研究的目的及意義
第二章 牛源抗金黃色葡萄球菌SCFV真核質粒的構建及其在小鼠乳腺內的表達時效研究
    2.1 材料
        2.1.1 菌種和質粒
        2.1.2 實驗動物
        2.1.3 主要試劑與儀器
    2.2 實驗動物的分組和處理
    2.3 實驗方法
        2.3.1 scFv的引物設計
        2.3.2 PCR擴增目的基因
        2.3.3 目的基因與pMD-18-T連接
        2.3.4 轉化
        2.3.5 質粒提取
        2.3.6 pMD-18-T-scFv質粒雙酶切鑒定
        2.3.7 重組真核質粒（pcDNA3.1-scFv）的構建
        2.3.8 pET-28a-scFv的原核表達蛋白的誘導
        2.3.9 蛋白的分離、純化
        2.3.10 兔抗牛源scFv多克隆抗體制備
        2.3.11 兔抗牛源scFv多克隆抗體ELISA效價測定
        2.3.12 pcDNA3.1-scFv重組質粒的無內毒素提取
        2.3.13 Western-blot驗證重組質粒在小鼠乳腺內的表達時效
    2.4 結果
        2.4.1 pcDNA3.1-scFv重組質粒的構建及鑒定
        2.4.2 pcDNA3.1-scFv真核重組質粒在小鼠乳腺內的表達時效
    2.5 討論
    2.6 本章小結
第三章 牛源抗金黃色葡萄球菌單鏈抗體防治小鼠乳腺炎的研究
    3.1 材料
        3.1.1 菌株和質粒
        3.1.2 主要試劑與儀器
        3.1.3 實驗動物
    3.2 實驗動物的分組和處理
        3.2.1 pcDNA3.1-scFv真核表達質粒針對小鼠乳腺炎的預防研究
        3.2.2 pcDNA3.1-scFv真核表達質粒針對小鼠乳腺炎的治療研究
    3.3 實驗方法
        3.3.1 乳腺組織細菌計數
        3.3.2 乳腺組織病理切片
        3.3.3 小鼠的乳腺組織細胞因子檢測（TNF-α、IL6和IL17）
    3.4 結果
        3.4.1 pcDNA3.1-scFv真核表達質粒針對小鼠乳腺炎的預防研究結果
        3.4.2 pcDNA3.1-scFv真核表達質粒針對小鼠乳腺炎的治療研究結果
    3.5 討論
    3.6 本章小結
第四章 牛源抗金黃色葡萄球菌SCFV針對奶牛隱性乳腺炎的治療研究
    4.1 材料
        4.1.1 質粒
        4.1.2 主要試劑與儀器
    4.2 實驗動物及分組
    4.3 實驗方法
        4.3.1 奶樣細菌計數
        4.3.2 CMT檢測和效果判定標準
        4.3.3 生物安全性評價
        4.3.4 乳樣、尿樣和糞樣基因組的提取
    4.4 結果
        4.4.1 奶樣細菌計數結果
        4.4.2 奶樣CMT檢測結果
        4.4.3 生物安全性評價結果
    4.5 討論
    4.6 本章小結
第五章 全文結論
參考文獻
附錄
致謝
攻讀碩士學位期間已發(fā)表或錄用的論文


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3159061