MicroRNAs （miRNAs）是一類長度約18～24nt的非編碼RNA,能夠與mRNA特異性結(jié)合從而調(diào)控基因的表達(dá),在細(xì)胞增殖、分化、代謝、凋亡和免疫應(yīng)答等生物學(xué)過程中具有重要作用。血液作為最重要的體液廣泛參與機(jī)體各個生物學(xué)過程,血液中的1miRNAs被報(bào)道能穩(wěn)定的存在于血液中作為生物體生理狀態(tài)和病理狀態(tài)的重要分子標(biāo)記。然而目前對于豬血液miRNA的研究相對較少,且都是對靜脈血液miRNA的研究,對于動脈血液中miRNA研究還完全是空白。為了鑒定豬血液miRNA表達(dá)譜和動靜脈血液在miRNA表達(dá)水平的差異,我們利用高通量測序技術(shù)檢測了豬的動脈血液和靜脈血液的miRNA表達(dá)譜,并用熒光定量方法進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果如下：（1） 通過建庫測序,分別在動脈血液和靜脈血液獲得了5.21 million （M）;和8.61 M原始數(shù)據(jù)。經(jīng)過濾后,超過78%的序列達(dá)到質(zhì)量要求成為mappable序列,這止匕mappable序列長度集中在21～23 nt。（2）兩個文庫共鑒定出272個豬已知的miRNAs.52個保守的：niRNAs和281個候選miRNAs,其中表達(dá)量位于前20位的miRNAs分別占... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 miRNA簡介
        1.1.1 miRNA的發(fā)現(xiàn)
        1.1.2 miRNA的生成
        1.1.3 miRNA的作用機(jī)制
        1.1.4 miRNA的檢測方法
    1.2 豬miRNA研究進(jìn)展
    1.3 血液miRNA研究進(jìn)展
        1.3.1 血液miRNA的發(fā)現(xiàn)和穩(wěn)定性
        1.3.2 血液miRNA的存在形式
        1.3.3 血液miRNA作為分子標(biāo)記
2 研究內(nèi)容與目的意義
3 材料和方法
    3.1 實(shí)驗(yàn)樣品采集
    3.2 主要儀器和試劑
        3.2.1 主要儀器設(shè)備
        3.2.2 主要試劑
    3.3 試驗(yàn)方法
        3.3.1 Total RNA的提取
        3.3.2 Total RNA的質(zhì)檢
        3.3.3 高通量測序
        3.3.4 miRNA定量
        3.3.5 靶基因預(yù)測和功能注解分析
4 結(jié)果與分析
    4.1 Total RNA提取結(jié)果
    4.2 測序結(jié)果
        4.2.1 原始數(shù)據(jù)結(jié)果
        4.2.2 Mappable序列長度分布統(tǒng)計(jì)
        4.2.3 核酸傾向性分析
        4.2.4 miRNA的鑒定和分組
        4.2.5 miRNA簇
    4.3 高表達(dá)miRNAs的分析
        4.3.1 miRNA的拷貝數(shù)變異
        4.3.2 高表達(dá)miRNAs的分析
        4.3.3 高表達(dá)miRNAs的靶基因預(yù)測
        4.3.4 高表達(dá)miRNAs的生物學(xué)過程分析
    4.4 動靜脈血液miRNA表達(dá)譜差異分析
        4.4.1 動靜脈血液miRNA的聚類分析
        4.4.2 IDEG6差異檢驗(yàn)差異miRNAs
        4.4.3 差異miRNAs生物學(xué)功能分析
    4.5 定量驗(yàn)證
5 討論
    5.1 Solexa測序的優(yōu)越性
    5.2 豬是理想的醫(yī)學(xué)動物模型
    5.3 血液miRNAs文庫表達(dá)譜特征
    5.4 高表達(dá)和差異表達(dá)的miRNAs
    5.5 基于血液miRNAs的核酸診斷和核酸治療
6 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號：3158438