豬源性外來病能夠通過國際間貿(mào)易交流、野生動物攜帶及昆蟲媒介傳入我國,一旦傳入將會給我國養(yǎng)豬業(yè)帶來嚴(yán)重的損失,甚至是公共衛(wèi)生問題。本研究以非洲豬瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）、尼帕病毒（Nipahvirus,NiV）、水皰性口 炎病毒（Vesicular stomatitis virus,VSV）、塞尼卡谷病毒（Seneca Valley virus,SW）以及口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus,FMDV）5 種豬源性病毒為研究對象,設(shè)計特異性擴增引物,利用多重PCR擴增得到帶有修飾的擴增產(chǎn)物,然后與微球雜交、孵育,并驗證方法的敏感性和特異性,以期構(gòu)建多種豬源性外來病的液相芯片檢測體系。主要研究結(jié)果如下:1.多種豬源性外來病單重PCR體系的建立建立的ASFV、NiV、VSV、SW和FMDV的單重PCR檢測方法,敏感性結(jié)果最低檢測量分別為 39.0copies/μ L、4.6copies/μ L、29.9copies/μ L、36.8copies/μ L和20.9copies/μ L;特異性結(jié)果為每種病毒的單重PCR... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 五種豬病及病毒概況
        1.1.1 非洲豬瘟
        1.1.2 尼帕病毒病
        1.1.3 水皰性口炎
        1.1.4 塞尼卡谷病毒病
        1.1.5 口蹄疫
    1.2 液相芯片
        1.2.1 液相芯片原理
        1.2.2 液相芯片技術(shù)的特點
    1.3 液相芯片技術(shù)的應(yīng)用
        1.3.1 豬病方面應(yīng)用
        1.3.2 禽病方面應(yīng)用
        1.3.3 反芻動物疫病方面
        1.3.4 實驗動物疫病方面
        1.3.5 人獸共患病方面
    1.4 研究目的與意義
2 多種豬源性外來病病毒單一PCR檢測方法的初步建立
    2.1 實驗材料及設(shè)備
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 實驗儀器設(shè)備
        2.1.3 病毒和毒株
        2.1.4 培養(yǎng)基及相關(guān)的制備
        2.1.5 引物的設(shè)計、合成與篩選
        2.1.6 疫苗核酸的提取及反轉(zhuǎn)錄
    2.2 方法
        2.2.1 構(gòu)建質(zhì)粒
            2.2.1.1 重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化
            2.2.1.2 重組質(zhì)粒的提取
            2.2.1.3 重組質(zhì)粒濃度的測定及拷貝數(shù)換算
        2.2.2 引物的篩選及單重PCR體系的建立
        2.2.3 單重PCR反應(yīng)敏感性實驗
        2.2.4 單重PCR反應(yīng)特異性實驗
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 拷貝數(shù)計算
        2.3.2 引物的初步篩選
        2.3.3 單重PCR反應(yīng)靈敏性結(jié)果
        2.3.4 單重PCR反應(yīng)特異性結(jié)果
    2.4 小結(jié)與討論
3 多種豬源性外來病病毒多重PCR檢測方法的建立
    3.1 多重PCR檢測體系的建立
        3.1.1 多重PCR退火溫度的優(yōu)化
        3.1.2 多重PCR方法敏感性實驗
        3.1.3 多重PCR方法特異性實驗
        3.1.4 多重PCR方法重復(fù)性實驗
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 多重PCR退火溫度的優(yōu)化
        3.2.2 多重PCR方法的靈敏性實驗結(jié)果
        3.2.3 多重PCR方法的特異性實驗結(jié)果
        3.2.4 多重PCR方法的穩(wěn)定性實驗結(jié)果
    3.3 小結(jié)與討論
4 多種豬源性外來病液相芯片檢測方法的建立
    4.1 實驗材料及設(shè)備
        4.1.1 實驗材料
        4.1.2 實驗儀器及設(shè)備
        4.1.3 病毒與毒株
        4.1.4 TAG的選擇與修飾引物合成
    4.2 方法
        4.2.1 微球雜交緩沖液的制備及體系建立
            4.2.1.1 微球工作液的制備
            4.2.1.2 SAPE報告液的制備
            4.2.1.3 微球雜交體系的建立
TM液相芯片檢測平臺初始化">        4.2.2 Luminex 200^TM液相芯片檢測平臺初始化
        4.2.3 PCR產(chǎn)物與微球雜交
        4.2.4 液相芯片雜交結(jié)果的判定
        4.2.5 液相芯片雜交條件的優(yōu)化
            4.2.5.1 液相芯片雜交時間的優(yōu)化
            4.2.5.2 液相芯片雜交溫度的優(yōu)化
        4.2.6 液相芯片檢測方法敏感性實驗
        4.2.7 液相芯片檢測方法特異性實驗
        4.2.8 液相芯片檢測方法穩(wěn)定性實驗
        4.2.9 臨床樣品檢測
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 液相芯片雜交時間優(yōu)化實驗結(jié)果
        4.3.2 液相芯片雜交溫度優(yōu)化實驗結(jié)果
        4.3.3 液相芯片敏感性實驗結(jié)果
        4.3.4 液相芯片特異性實驗結(jié)果
        4.3.5 液相芯片穩(wěn)定性實驗結(jié)果
        4.3.6 臨床樣品檢測
    4.4 小結(jié)與討論
5 結(jié)論
致謝
參考文獻
作者簡介


【參考文獻】：
期刊論文
[1]中西藥結(jié)合防治牦牛水皰性口炎[J]. 措加卓瑪.  畜牧業(yè)環(huán)境. 2020(01)
[2]牛常見傳染病癥狀及防控措施[J]. 弟保.  畜牧獸醫(yī)科學(xué)(電子版). 2019(23)
[3]兔水皰性口炎的診治[J]. 向承西.  當(dāng)代畜禽養(yǎng)殖業(yè). 2019(09)
[4]非洲豬瘟流行現(xiàn)狀及防控[J]. 李金明.  獸醫(yī)導(dǎo)刊. 2019(17)
[5]尼帕病毒全球流行態(tài)勢解析[J]. 金寧一,許汪,杜壽文,李昌,李體遠(yuǎn),吳詩品.  新發(fā)傳染病電子雜志. 2019(03)
[6]家畜水皰性口炎的發(fā)生、診斷和防控措施[J]. 董敏.  飼料博覽. 2019(07)
[7]1998-2018年全球尼帕病毒感染流行特征及危險因素分析[J]. 辛化雷,薛愛麗,梁紀(jì)偉,邱波,董禮艷,潘蓓,賈靜,韓雅琳,胡曉雯,張婧菲,李中杰,姜法春.  疾病監(jiān)測. 2019(01)
[8]6種人獸共患病病原核酸液相芯片檢測體系的建立[J]. 王艷,沈家紅,蔣蔚,張磊萍,張強,林穎崢,熊煒,李樹清.  中國動物檢疫. 2018(12)
[9]高通量核酸液相芯片檢測法對H5、H9亞型禽流感病毒及新城疫病毒的檢測[J]. 張婷,謝晉雄,詹愛軍,吳雯娟,黃彬庚,吳紹精,陳勇.  中國家禽. 2018(16)
[10]液相芯片技術(shù)在檢驗醫(yī)學(xué)和生物醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用[J]. 許友強,陳貴雪,李博,張巖,周婷婷,李雨艷.  大醫(yī)生. 2018(06)

碩士論文
[1]Luminex液相芯片同時檢測小鼠3種病毒方法的建立[D]. 劉春梅.揚州大學(xué) 2015
[2]基于IPaH 1基因液相芯片技術(shù)快速檢測志賀氏菌的研究[D]. 文雪.吉林大學(xué) 2013
[3]AIV，NDV，IBV和ILTV液相檢測芯片方法的建立[D]. 張曉娜.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012



本文編號：3157145