牛病毒性腹瀉病毒（Bovine viral diarrhea virus,BVDV）可引起牛病毒性腹瀉/粘膜�。˙ovine viral diarrhea/mucosal disease,BVD/MD）。感染BVDV的牛臨床癥狀表現(xiàn)為精神沉郁、采食量下降、大量流涎、腹瀉、口腔黏膜充血潰瘍,孕牛表現(xiàn)為流產(chǎn)或產(chǎn)出畸形胎兒或產(chǎn)出持續(xù)感染牛,新生犢牛因嚴(yán)重腹瀉而死亡。目前BVDV在世界范圍內(nèi)流行,引起各個(gè)國(guó)家的高度關(guān)注。BVDV也是組織細(xì)胞培養(yǎng)及生物制品中最為常見(jiàn)的外源性病毒。根據(jù)BVDV 5’非編碼區(qū)（5’UTR）的不同可以分為BVDV-1型和BVDV-2型兩個(gè)基因型。不同基因型又進(jìn)一步分為不同的基因亞型。根據(jù)接種細(xì)胞后能否產(chǎn)生細(xì)胞病變,BVDV分為致細(xì)胞病變型（CP）和非致細(xì)胞病變型（NCP）。若懷孕母牛感染NCP型BVDV后,會(huì)導(dǎo)致胎兒免疫耐受,胎兒或繼續(xù)發(fā)育或流產(chǎn),即使順利產(chǎn)出也會(huì)成為持續(xù)感染（PI）牛,可持續(xù)向外界排毒,成為BVDV主要的傳染源。而目前國(guó)內(nèi)尚無(wú)商品化的檢測(cè)試劑和相關(guān)疫苗。p80蛋白是BVDV非結(jié)構(gòu)蛋白之一,在瘟病毒屬中是一種突變率很低的非常保守的免疫優(yōu)勢(shì)蛋白,具有重要... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：50 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 引言
    1.1 牛病毒性腹瀉病毒概述
        1.1.1 牛病毒性腹瀉病原的發(fā)現(xiàn)和分類(lèi)
        1.1.2 病毒粒子的結(jié)構(gòu)特征及理化性質(zhì)
    1.2 BVDV分類(lèi)及亞型
    1.3 流行病學(xué)
        1.3.1 BVDV的宿主和傳染源
        1.3.2 BVDV的流行情況
    1.4 病毒基因組
    1.5 BVDV編碼的蛋白及功能
    1.6 BVDV的檢測(cè)
    1.7 BVDV的疫苗及防控
    1.8 研究目的和意義
第二章 牛病毒性腹瀉病毒p80蛋白單克隆抗體的制備
    2.1 材料與方法
        2.1.1 細(xì)胞、毒株、質(zhì)粒和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 引物設(shè)計(jì)和目的基因的擴(kuò)增
        2.1.4 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.1.5 p80蛋白的表達(dá)與純化
        2.1.6 重組蛋白的Western blot分析
        2.1.7 小鼠的免疫
        2.1.8 飼養(yǎng)層的制備
        2.1.9 骨髓瘤（SP2/0）細(xì)胞的準(zhǔn)備
        2.1.10 脾細(xì)胞的準(zhǔn)備
        2.1.11 骨髓瘤（SP2/0）細(xì)胞和脾細(xì)胞的融合
        2.1.12 間接ELISA的建立
        2.1.13 陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞株的篩選與克隆純化
        2.1.14 MAb亞類(lèi)的鑒定
        2.1.15 腹水制備及效價(jià)測(cè)定
        2.1.16 MAb的間接免疫熒光（IFA）鑒定
        2.1.17 MAb與豬瘟病毒交叉反應(yīng)的間接免疫熒光檢測(cè)（IFA）
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 目的基因的擴(kuò)增與pET30A-P80重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2.2 重組p80蛋白的表達(dá)與鑒定
        2.2.3 重組蛋白p80的純化與Western blot分析
        2.2.4 雜交瘤細(xì)胞株的篩選、MAb亞類(lèi)的鑒定及腹水效價(jià)的測(cè)定
        2.2.5 MAb間接免疫熒光檢測(cè)
    2.3 討論
第三章 p80蛋白抗原表位的鑒定
    3.1 材料與方法
        3.1.1 試劑與儀器
        3.1.2 p80蛋白截短表達(dá)方案
        3.1.3 pGEX-6P-1 表達(dá)載體的構(gòu)建及截短蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
        3.1.4 誘導(dǎo)蛋白的SDS-PAGE和Western blot分析
    3.2 SDS-PAGE和Western blot結(jié)果及分析
    3.3 討論
第四章 牛病毒性腹瀉病毒LJ36/14的分離與鑒定
    4.1 材料和方法
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料及樣品
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 樣品處理與病毒分離
        4.1.4 分離株的RT-PCR檢測(cè)及測(cè)序
        4.1.5 分離株的鑒定及其TCID50的測(cè)定
        4.1.6 分離株的分子進(jìn)化分析
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 病毒分離及RT-PCR檢測(cè)結(jié)果
        4.2.2 分離株的免疫熒光鑒定
        4.2.3 分離株的分子進(jìn)化樹(shù)的構(gòu)建
    4.3 討論
第五章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]牛病毒性腹瀉病毒E0蛋白的表達(dá)與多克隆抗體制備[J]. 王雪枝,朱遠(yuǎn)茂,史鴻飛,嚴(yán)昊,蔡紅,王姝,馬磊,薛飛.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2014(05)
[2]牛病毒性腹瀉病毒雙單克隆抗體夾心ELISA檢測(cè)方法的建立及初步應(yīng)用[J]. 楊俊興,曹琛福,曾少靈,盧體康,孫潔,張彩虹,唐金明,陶虹,呂建強(qiáng),花群義.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2013(05)
[3]福建龍巖規(guī)�；i場(chǎng)BVDV感染的血清學(xué)調(diào)查[J]. 戴愛(ài)玲,魏春華,黃思瓊,李曉華,楊小燕.  龍巖學(xué)院學(xué)報(bào). 2013(02)
[4]牛病毒性腹瀉病毒E2蛋白單克隆抗體的制備及初步鑒定[J]. 王姝,朱遠(yuǎn)茂,蔡紅,馬磊,史鴻飛,呂闖,董秀梅,高欲燃,薛飛.  中國(guó)生物工程雜志. 2013(04)
[5]牛病毒性腹瀉病毒夾心ELISA快速檢測(cè)方法的建立與初步應(yīng)用[J]. 李倬,馬省強(qiáng),陳文芳,石真真,平玲.  甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2012(03)
[6]豬瘟和藍(lán)耳病疫苗中BVDV和PCV污染情況調(diào)查[J]. 葉兆美.  四川畜牧獸醫(yī). 2012(03)
[7]牛副流感病毒3型的分離鑒定及感染牛抗體消長(zhǎng)規(guī)律的研究[J]. 周玉龍,吳海濤,任亞超,耿靜,王密,謝金鑫,樸范澤.  中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào). 2011(01)
[8]牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）抗原捕獲ELISA檢測(cè)方法的建立[J]. 張麗穎,劉暢,鮑永華,趙志輝.  畜牧與獸醫(yī). 2009(08)
[9]豬源牛病毒性腹瀉病毒的流行初探[J]. 宋永峰,張志,張燕霞,吳發(fā)興,李曉成.  中國(guó)動(dòng)物檢疫. 2008(07)
[10]牛病毒性腹瀉病毒基因組結(jié)構(gòu)與蛋白功能研究進(jìn)展[J]. 范進(jìn)江,薄新文,鐘發(fā)剛.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2008(05)



本文編號(hào)：3157053