為篩選藏豬DNA甲基轉(zhuǎn)移酶3a（Dnmt3a）基因的單核苷酸多態(tài)性（SNP）,分析Dnmt3a基因在藏豬精子中的表達(dá)水平,采用PCR-直接測序法對藏豬、大白豬、滇南小耳豬Dnmt3a基因進(jìn)行SNP分析;分別應(yīng)用實時熒光定量PCR技術(shù)、Westen blot方法對藏豬、大白豬精子中Dnmt3a基因的mRNA與蛋白質(zhì)表達(dá)水平進(jìn)行檢測。結(jié)果顯示,在Dnmt3a基因5′側(cè)翼和第11外顯子區(qū)發(fā)現(xiàn)2個SNP位點,位于藏豬Dnmt3a基因的5′側(cè)翼區(qū)起始密碼子上游2 012 bp處的SNP（C→T）位點,其雜合度、多態(tài)信息含量均較高,表明群體內(nèi)變異程度大、能提供的遺傳信息較多,但該位點不是藏豬特有的SNP;位于藏豬Dnmt3a基因的第11外顯子區(qū)第1 360 bp處的SNP（C→T）位點,其雜合度、多態(tài)信息含量均較低,表明群體內(nèi)變異程度小、能提供的遺傳信息較少。藏豬精子中,Dnmt3a基因mRNA與蛋白質(zhì)水平上的相對表達(dá)量均顯著（P<0.05）低于大白豬。以上結(jié)果表明,藏豬Dnmt3a基因5′側(cè)翼區(qū)起始密碼子上游2 012 bp的突變位點可以作為藏豬分子育種中的候選標(biāo)志;相對于大白豬,Dnmt... 

【文章來源】：河南農(nóng)業(yè)科學(xué). 2020,49(10)北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
        1.1.1 樣品采集及處理
        1.1.2 主要試劑與儀器設(shè)備
    1.2 引物設(shè)計與合成
    1.3 組織DNA和RNA提取
        1.3.1 DNA提取
        1.3.2 RNA提取及cDNA合成
    1.4 Dnmt3a基因SNP篩選
        1.4.1 PCR擴(kuò)增
        1.4.2 SNP分析
    1.5 Dnmt3a基因?qū)崟r熒光定量PCR
        1.5.1 PCR擴(kuò)增
        1.5.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備及實時熒光定量PCR
    1.6 Dnmt3a蛋白表達(dá)水平檢測
        1.6.1 精子總蛋白質(zhì)的提取與定量
        1.6.2 Westen blot方法檢測Dnmt3a蛋白表達(dá)水平
    1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
2 結(jié)果與分析
    2.1 Dnmt3a基因5′側(cè)翼區(qū)與外顯子區(qū)的SNP篩選
    2.2 藏豬精子中Dnmt3a基因mRNA表達(dá)水平
    2.3 藏豬精子中Dnmt3a蛋白表達(dá)水平
3 結(jié)論與討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]藏豬睪丸DNA甲基化與HIF2α基因mRNA表達(dá)水平的相關(guān)性[J]. 趙彥玲,張博,王志秀,張紅亮,張浩.  中國獸醫(yī)學(xué)報. 2017(11)
[2]犏牛雄性不育的DNA甲基化[J]. 趙彥玲,任子利,李瑜鑫,王建洲,商鵬,強(qiáng)巴央宗.  中國獸醫(yī)學(xué)報. 2017(04)
[3]高原藏豬現(xiàn)狀與保種策略[J]. 強(qiáng)巴央宗,謝莊,田發(fā)益.  中國畜牧雜志. 2001(06)

博士論文
[1]豬低氧適應(yīng)相關(guān)DNA甲基化位點篩選及表觀修飾酶表達(dá)分析[D]. 班冬梅.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014



本文編號：3154103