豬流行性腹瀉病毒（porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）是目前威脅全世界養(yǎng)豬業(yè)的主要腸道病原體之一。PEDV感染新生仔豬,會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的腹瀉、脫水和死亡。從2010年開(kāi)始,PED（porcine epidemic diarrhea）在中國(guó)地區(qū)大規(guī)模爆發(fā),造成了該產(chǎn)業(yè)的巨大損失。PEDV屬于冠狀病毒科α冠狀病毒屬,擁有約28 kb的單股正鏈RNA基因組,它的基因組編碼病毒復(fù)制酶多聚蛋白（pp）la和1ab,棘突（S）,附屬蛋白（ORF3）,包膜（E）,膜（M）和核衣殼（N）蛋白。orf3位于PEDV基因組中s基因與e基因之間,編碼224個(gè)氨基酸約為25 k D的蛋白質(zhì)。但在細(xì)胞適應(yīng)的PEDV毒株中,ORF3往往會(huì)有49個(gè)核苷酸的缺失,攜帶該基因的毒株比較典型的是弱毒的DR13(本研究中命名為DR13^att)。關(guān)于由orf3基因編碼的ORF3蛋白,它的功能研究還比較薄弱。有文獻(xiàn)報(bào)道PEDV可以引起感染細(xì)胞凋亡。在我們前期研究中,發(fā)現(xiàn)攜帶orf3的重組PEDV所致細(xì)胞壞死狀態(tài)要輕于不攜帶該基因的重組PEDV。因此我們推測(cè)ORF3蛋白對(duì)于... 

【文章來(lái)源】：上海海洋大學(xué)上海市

【文章頁(yè)數(shù)】：56 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 引言
    1.1 豬流行性腹瀉病毒
        1.1.1 流行病學(xué)
        1.1.2 PEDV的基因組組成
        1.1.3 PEDV的培養(yǎng)特性
        1.1.4 PEDV的結(jié)構(gòu)蛋白
        1.1.5 ORF3蛋白
        1.1.6 診斷
        1.1.7 疫苗
    1.2 細(xì)胞凋亡
        1.2.1 細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化
        1.2.2 Caspase
        1.2.3 Caspase依賴(lài)的細(xì)胞凋亡
    1.3 病毒與細(xì)胞凋亡的關(guān)系
    1.4 ORF3蛋白的研究進(jìn)展
    1.5 本實(shí)驗(yàn)的研究意義及主要內(nèi)容
第二章 病毒感染及病毒蛋白的表達(dá)
    2.1 材料
        2.1.1 細(xì)胞與毒株
        2.1.2 主要試劑與儀器
    2.2 方法
        2.2.1 病毒感染后觀察細(xì)胞病變
        2.2.2 免疫熒光（Immunofluorescence,IFA）
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 觀察不同PEDV感染造成的細(xì)胞病變差異
        2.3.2 PEDV感染細(xì)胞后病毒S蛋白和ORF3 蛋白的表達(dá)情況
    2.4 討論
第三章 ORF3與病毒誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的關(guān)系
    3.1 材料
        3.1.1 細(xì)胞與毒株
        3.1.2 主要試劑與儀器
    3.2 原理
        3.2.1 細(xì)胞凋亡試劑盒檢測(cè)原理
        3.2.2 活細(xì)胞成像原理
        3.2.3 流式細(xì)胞原理
        3.2.4 TUNEL原理
    3.3 方法
        3.3.1 活細(xì)胞成像
        3.3.2 流式細(xì)胞術(shù)
        3.3.3 TUNEL
        3.3.4 SDS-PAGE及 Western blot
    3.4 數(shù)據(jù)分析
    3.5 結(jié)果
        3.5.1 活細(xì)胞成像觀察分析不同PEDV誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡情況
        3.5.2 流式細(xì)胞術(shù)分析不同PEDV感染誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的差異
        3.5.3 TUNEL染色分析不同PEDV感染誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的差異
        3.5.4 Western blot檢測(cè)PEDV感染細(xì)胞中Caspase蛋白活化
    3.6 討論
第四章 PEDV感染細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序及熒光定量PCR驗(yàn)證
    4.1 材料
        4.1.1 細(xì)胞與毒株
        4.1.2 主要試劑與儀器
    4.2 實(shí)驗(yàn)原理
        4.2.1 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序原理
        4.2.2 熒光定量PCR原理
    4.3 方法
        4.3.1 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序方法
        4.3.2 總RNA提取的方法
        4.3.3 熒光定量PCR方法
    4.4 結(jié)果
        4.4.1 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析不同PEDV感染細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄組差異
        4.4.2 熒光定量PCR結(jié)果
    4.5 討論
第五章 全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
研究生期間相關(guān)科研成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]SARS-CoV感染Vero E6細(xì)胞誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[J]. 鄢然,沈超,雷磊,鄭從義,肖庚富,郭德銀,朱應(yīng),鄢慧民.  中國(guó)病毒學(xué). 2003(06)

博士論文
[1]PEDV感染豬空腸組織的蛋白質(zhì)組學(xué)分析及hnRNP A1影響PEDV復(fù)制的作用機(jī)制研究[D]. 李中華.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018



本文編號(hào)：3152759