海藻糖是具有抗氧化功能和非滲透性冷凍保護功能的雙糖。目前被廣泛應用于細胞和精液的冷凍中。但其作用機制仍未完全闡明,本試驗通過探究不同濃度的海藻糖,不同降溫速度,海藻糖和甘油的不同組合方式對絨山羊精液冷凍的影響。同時利用代謝組學從代謝物層面分析海藻糖對精子冷凍保存的影響,探究海藻糖對內蒙古絨山羊精子冷凍保存的作用機制。本研究主要獲得以下結果:1.比較了不同降溫速度對內蒙古絨山羊精液冷凍保存的影響,與傳統(tǒng)的Tris-檸檬酸-葡萄糖（TCG）稀釋液相比,在絨山羊精液冷凍稀釋液中添加海藻糖,精子最佳降溫速度為0.16℃/min,精子冷凍解凍后的活力達到58.3%。而使用TCG時的降溫速度在0.2-0.25℃/min之間時,精子活力最高,達到56.1%。因此,當添加海藻糖進行絨山羊精液冷凍時,應使用較慢的速度進行降溫,當降溫速度保持在0.16℃/min時,內蒙古絨山羊精液冷凍保存效果最好。2.比較了海藻糖和甘油的不同組合方式對絨山羊精液冷凍解凍后的活力、精子結構、抗氧化性能的影響。0 mM（T0）、50 mM（T50）的海藻糖和0%（G0）、1%（G1）、2%（G2）、3%（G3）的甘油分別組合... 

【文章來源】：內蒙古農業(yè)大學內蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表
1 前言
    1.1 山羊精液冷凍保存研究進展
    1.2 山羊精液稀釋液
        1.2.1 糖類
        1.2.2 冷凍保護劑
        1.2.3 抗氧化劑
    1.3 代謝組學研究進展
    1.4 代謝組學原理及優(yōu)勢
    1.5 基于代謝組學對精子進行研究
    1.6 研究的目的和意義
    1.7 技術路線
2 試驗研究
    2.1 添加海藻糖時降溫速度對精子活力的影響
        2.1.1 材料與方法
            2.1.1.1 主要試劑與儀器
            2.1.1.2 試驗動物
            2.1.1.3 稀釋液配制與精液采集
            2.1.1.4 精液冷凍
        2.1.2 精子活力檢測
        2.1.3 試驗設計
        2.1.4 數(shù)據(jù)分析
        2.1.5 試驗結果
            2.1.5.1 降溫速度對精子活力的影響
        2.1.6 討論
        2.1.7 小結
    2.2 海藻糖和甘油協(xié)同作用對精子冷凍保存的影響
        2.2.1 材料與方法
            2.2.1.1 藥品和試劑
            2.2.1.2 試驗動物
            2.2.1.3 稀釋液配制
            2.2.1.4 精液冷凍
        2.2.2 精子品質檢測
            2.2.2.1 精子活力檢測
            2.2.2.2 精子結構檢測
            2.2.2.3 精子中總SOD酶和丙二醛含量檢測
2+水平檢測">            2.2.2.4 精子中ROS和Ca²⁺水平檢測
            2.2.2.5 酪氨酸磷蛋白的免疫熒光
        2.2.3 試驗設計
        2.2.4 試驗數(shù)據(jù)分析
        2.2.5 試驗結果
            2.2.5.1 無葡萄糖時,海藻糖和甘油聯(lián)合作用對精子活力和運動的影響
            2.2.5.2 存在葡萄糖時,海藻糖和甘油聯(lián)合作用對精子品質影響
                2.2.5.2.1 海藻糖甘油聯(lián)合作用對精子冷凍保存后運動性能的影響
                2.2.5.2.2 海藻糖甘油協(xié)同作用對精子冷凍保存后結構完整性的影響
                2.2.5.2.3 海藻糖甘油協(xié)同作用對精子中SOD酶和丙二醛含量的影響
2+水平的影響">                2.2.5.2.4 海藻糖甘油協(xié)同作用對精子中ROS和Ca²⁺水平的影響
                2.2.5.2.5 海藻糖對精子酪氨酸磷酸化的影響
        2.2.6 討論
        2.2.7 小結
    2.3 基于代謝組學分析海藻糖對絨山羊精液冷凍保存的影響
        2.3.1 材料與方法
            2.3.1.1 主要試劑與儀器
        2.3.2 試驗動物
        2.3.3 試驗步驟
            2.3.3.1 試驗樣品采集
            2.3.3.2 前處理
            2.3.3.3 氣相色譜-質譜準備
        2.3.4 試驗設計
        2.3.5 數(shù)據(jù)分析
            2.3.5.1 數(shù)據(jù)預處理
                2.3.5.1.1 定性分析
                2.3.5.1.2 GC-MS數(shù)據(jù)庫
                2.3.5.1.3 定性定量結果
            2.3.5.2 多元統(tǒng)計分析
        2.3.6 試驗結果
            2.3.6.1 試驗數(shù)據(jù)準確性檢驗
            2.3.6.2 差異代謝物分析
            2.3.6.3 潛在生物標記物篩選
            2.3.6.4 代謝物相關性分析
        2.3.7 討論
        2.3.8 小結
3 結論
致謝
參考文獻
附錄
作者簡介


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3152522