發(fā)布時(shí)間：2021-04-21 21:28

　　海藻糖是具有抗氧化功能和非滲透性冷凍保護(hù)功能的雙糖。目前被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞和精液的冷凍中。但其作用機(jī)制仍未完全闡明,本試驗(yàn)通過探究不同濃度的海藻糖,不同降溫速度,海藻糖和甘油的不同組合方式對絨山羊精液冷凍的影響。同時(shí)利用代謝組學(xué)從代謝物層面分析海藻糖對精子冷凍保存的影響,探究海藻糖對內(nèi)蒙古絨山羊精子冷凍保存的作用機(jī)制。本研究主要獲得以下結(jié)果:1.比較了不同降溫速度對內(nèi)蒙古絨山羊精液冷凍保存的影響,與傳統(tǒng)的Tris-檸檬酸-葡萄糖（TCG）稀釋液相比,在絨山羊精液冷凍稀釋液中添加海藻糖,精子最佳降溫速度為0.16℃/min,精子冷凍解凍后的活力達(dá)到58.3%。而使用TCG時(shí)的降溫速度在0.2-0.25℃/min之間時(shí),精子活力最高,達(dá)到56.1%。因此,當(dāng)添加海藻糖進(jìn)行絨山羊精液冷凍時(shí),應(yīng)使用較慢的速度進(jìn)行降溫,當(dāng)降溫速度保持在0.16℃/min時(shí),內(nèi)蒙古絨山羊精液冷凍保存效果最好。2.比較了海藻糖和甘油的不同組合方式對絨山羊精液冷凍解凍后的活力、精子結(jié)構(gòu)、抗氧化性能的影響。0 mM（T0）、50 mM（T50）的海藻糖和0%（G0）、1%（G1）、2%（G2）、3%（G3）的甘油分別組合... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表
1 前言
    1.1 山羊精液冷凍保存研究進(jìn)展
    1.2 山羊精液稀釋液
        1.2.1 糖類
        1.2.2 冷凍保護(hù)劑
        1.2.3 抗氧化劑
    1.3 代謝組學(xué)研究進(jìn)展
    1.4 代謝組學(xué)原理及優(yōu)勢
    1.5 基于代謝組學(xué)對精子進(jìn)行研究
    1.6 研究的目的和意義
    1.7 技術(shù)路線
2 試驗(yàn)研究
    2.1 添加海藻糖時(shí)降溫速度對精子活力的影響
        2.1.1 材料與方法
            2.1.1.1 主要試劑與儀器
            2.1.1.2 試驗(yàn)動物
            2.1.1.3 稀釋液配制與精液采集
            2.1.1.4 精液冷凍
        2.1.2 精子活力檢測
        2.1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
        2.1.4 數(shù)據(jù)分析
        2.1.5 試驗(yàn)結(jié)果
            2.1.5.1 降溫速度對精子活力的影響
        2.1.6 討論
        2.1.7 小結(jié)
    2.2 海藻糖和甘油協(xié)同作用對精子冷凍保存的影響
        2.2.1 材料與方法
            2.2.1.1 藥品和試劑
            2.2.1.2 試驗(yàn)動物
            2.2.1.3 稀釋液配制
            2.2.1.4 精液冷凍
        2.2.2 精子品質(zhì)檢測
            2.2.2.1 精子活力檢測
            2.2.2.2 精子結(jié)構(gòu)檢測
            2.2.2.3 精子中總SOD酶和丙二醛含量檢測
2+水平檢測">            2.2.2.4 精子中ROS和Ca²⁺水平檢測
            2.2.2.5 酪氨酸磷蛋白的免疫熒光
        2.2.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
        2.2.4 試驗(yàn)數(shù)據(jù)分析
        2.2.5 試驗(yàn)結(jié)果
            2.2.5.1 無葡萄糖時(shí),海藻糖和甘油聯(lián)合作用對精子活力和運(yùn)動的影響
            2.2.5.2 存在葡萄糖時(shí),海藻糖和甘油聯(lián)合作用對精子品質(zhì)影響
                2.2.5.2.1 海藻糖甘油聯(lián)合作用對精子冷凍保存后運(yùn)動性能的影響
                2.2.5.2.2 海藻糖甘油協(xié)同作用對精子冷凍保存后結(jié)構(gòu)完整性的影響
                2.2.5.2.3 海藻糖甘油協(xié)同作用對精子中SOD酶和丙二醛含量的影響
2+水平的影響">                2.2.5.2.4 海藻糖甘油協(xié)同作用對精子中ROS和Ca²⁺水平的影響
                2.2.5.2.5 海藻糖對精子酪氨酸磷酸化的影響
        2.2.6 討論
        2.2.7 小結(jié)
    2.3 基于代謝組學(xué)分析海藻糖對絨山羊精液冷凍保存的影響
        2.3.1 材料與方法
            2.3.1.1 主要試劑與儀器
        2.3.2 試驗(yàn)動物
        2.3.3 試驗(yàn)步驟
            2.3.3.1 試驗(yàn)樣品采集
            2.3.3.2 前處理
            2.3.3.3 氣相色譜-質(zhì)譜準(zhǔn)備
        2.3.4 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
        2.3.5 數(shù)據(jù)分析
            2.3.5.1 數(shù)據(jù)預(yù)處理
                2.3.5.1.1 定性分析
                2.3.5.1.2 GC-MS數(shù)據(jù)庫
                2.3.5.1.3 定性定量結(jié)果
            2.3.5.2 多元統(tǒng)計(jì)分析
        2.3.6 試驗(yàn)結(jié)果
            2.3.6.1 試驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性檢驗(yàn)
            2.3.6.2 差異代謝物分析
            2.3.6.3 潛在生物標(biāo)記物篩選
            2.3.6.4 代謝物相關(guān)性分析
        2.3.7 討論
        2.3.8 小結(jié)
3 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄
作者簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3152522