鳥類的排卵是由體內(nèi)的LH峰促發(fā),在卵泡中排卵周期受到時(shí)鐘基因轉(zhuǎn)錄水平和生物節(jié)律影響。本研究以家雞的排卵前卵泡（F1）顆粒細(xì)胞為研究對象,采用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)的方法,通過cAMP、p38MAPK、ERK1/2通路抑制劑和LH激素的處理,探討LH信號級聯(lián)通路在節(jié)律時(shí)鐘基因中的作用。主要研究結(jié)果如下：采用qPCR方法檢測了時(shí)鐘基因（Bmal1、Clock、Cry1、Per2和Rev-erbβ）、時(shí)控基因（Star）、Egr-1 （LH刺激卵泡的應(yīng)答基因）和LHr （LH激素受體基因）在顆粒細(xì)胞中的表達(dá)量。結(jié)果表明對照組中Clock、Cry1、Per2、Star和Rev-erbβ匈在CT12的時(shí)候出現(xiàn)了一個(gè)峰值,時(shí)鐘基因在24小時(shí)里具有顯著的節(jié)律性和轉(zhuǎn)錄水平變化。作為LH激素刺激的應(yīng)答基因Egr-1逐漸升高并在CT12也出現(xiàn)一個(gè)表達(dá)峰,表明在排卵前顆粒細(xì)胞中細(xì)胞自主節(jié)律無時(shí)無刻的存在,也就是說顆粒細(xì)胞在無需要外接調(diào)節(jié)或者刺激就具有生物節(jié)律這一特性。在24小時(shí)培養(yǎng)周期里,LH激素誘導(dǎo)時(shí)鐘基因轉(zhuǎn)錄水平升高,尤其Bmall和Per2基因的轉(zhuǎn)錄水平被快速上調(diào),且LH刺激改變了時(shí)鐘基因的周期時(shí)間,其中L... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 生物節(jié)律
        1.1.1 生物節(jié)律的類型及其對生物的生理過程調(diào)節(jié)的重要性
        1.1.2 生物節(jié)律的內(nèi)源性以及其運(yùn)行機(jī)制
        1.1.3 影響生物時(shí)鐘的因素
        1.1.4 生物節(jié)律的應(yīng)用
    1.2 生物時(shí)鐘
        1.2.1 時(shí)鐘機(jī)制的普遍存在性
        1.2.2 時(shí)鐘基因
        1.2.3 生物節(jié)律周期探測方法
    1.3 卵巢及卵泡功能的調(diào)節(jié)
        1.3.1 卵泡顆粒細(xì)胞
        1.3.2 卵黃形成過程
        1.3.3 下丘腦-垂體-性腺軸（HPG）對性腺發(fā)育的調(diào)控機(jī)理
        1.3.4 性腺激素
        1.3.5 促黃體生成素（LH）下游信號通路
    1.4 本研究的目的意義和主要內(nèi)容
        1.4.1 研究的目的意義
        1.4.2 主要研究內(nèi)容
2 材料與方法
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 試驗(yàn)試劑
        2.1.3 試驗(yàn)儀器
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 蛋雞產(chǎn)蛋記錄
        2.2.2 卵泡顆粒層細(xì)胞HE染色
        2.2.3 雞卵巢顆粒細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.4 激素和抑制劑處理
        2.2.5 RNA提取和qPCR
    2.3 數(shù)據(jù)分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 顆粒細(xì)胞中時(shí)鐘基因的表達(dá)結(jié)果
    3.2 LH對顆粒細(xì)胞時(shí)鐘基因表達(dá)的影響
    3.3 cAMP、p38MAPK和ERK1/2通路的作用
    3.4 LH對VLDLr表達(dá)的影響
    3.5 cAMP對LH調(diào)控時(shí)鐘基因表達(dá)節(jié)律的作用
    3.6 p38MAPK和ERK1/2在LH誘導(dǎo)時(shí)鐘基因表達(dá)的作用
4 討論
    4.1 對顆粒細(xì)胞自主節(jié)律分析
    4.2 LH激素對顆粒細(xì)胞時(shí)鐘基因的作用
    4.3 顆粒細(xì)胞生物節(jié)律衰減分析
    4.4 cAMP、p38MAPK和ERK1/2信號通路作用
    4.5 卵黃形成對排卵的影響
    4.6 cAMP通路對時(shí)鐘基因生物節(jié)律的影響
    4.7 p38MAPK和ERK1/2通路對時(shí)鐘基因表達(dá)的影響
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間參加的科研工作和發(fā)表論文等



本文編號：3151629