為了構建敖漢細毛羊Hoxa7基因表達載體以及研究表達載體轉染成纖維細胞后基因表達量的變化,試驗從40日齡敖漢細毛羊肩部皮膚提取RNA并反轉錄成cDNA,參照GenBank中Hoxa7基因的CDS區(qū)序列設計1對引物;將PCR擴增獲取的Hoxa7基因CDS片段連接到pEASYTM-T1載體上,構建pEASYTM-T1-Hoxa7克隆載體,將克隆載體轉化至大腸桿菌DH5α感受態(tài)細胞中;從pEASYTM-T1載體上切下Hoxa7基因片段,連接到pcDNA3.1表達載體上,再次轉化至大腸桿菌DH5α感受態(tài)細胞中;將重組表達載體pcDNA3.1-Hoxa7瞬時轉染到傳代的成纖維細胞中,利用實時熒光定量PCR技術、Western-blot方法檢測成纖維細胞中Hoxa7基因的mRNA和蛋白表達情況。結果表明:重組表達載體pcDNA3.1-Hoxa7構建成功;瞬時轉染到成纖維細胞中后, Hoxa7基因的mRNA和蛋白表達量均極顯著升高（P<0.01）。說明敖漢細毛羊Hoxa7基因在成纖維細胞中能夠高效表達。 

【文章來源】：黑龍江畜牧獸醫(yī). 2020,(11)北大核心

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料
    1.1 試驗動物
    1.2 主要試劑
    1.3 主要儀器
2 方法
    2.1 引物的設計與合成
    2.2 目的基因的PCR擴增
    2.3 TA克隆測序
    2.4 Hoxa7基因與pcDNA3.1表達載體重組
    2.5 成纖維細胞的培養(yǎng)與轉染
    2.6 實時熒光定量PCR擴增
    2.7 Hoxa7基因編碼蛋白的檢測
    2.8 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析
3 結果與分析
    3.1 Hoxa7基因的PCR擴增
    3.2 TA克隆測序
    3.3 Hoxa7基因與pcDNA3.1表達載體重組
        3.3.1 克隆載體的鑒定及提取
        3.3.2 克隆載體及pcDNA3.1表達載體雙酶切
        3.3.3 pcDNA3.1表達載體與Hoxa7基因的連接鑒定
        3.3.4 重組表達載體菌液的測序
    3.4 成纖維細胞觀察
        3.4.1 原代細胞觀察
        3.4.2 傳代細胞觀察
    3.5 實時熒光定量PCR擴增
    3.6 Hoxa7基因編碼蛋白的檢測
4 討論
5 結論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]敖漢細毛羊Hoxa5基因質粒的構建及在成纖維細胞中表達量的研究[J]. 張夢瑤,楊峰,劉開東,劉積鳳,柳楠,賀建寧.  中國獸醫(yī)雜志. 2018(10)
[2]HOXA7在口腔鱗狀細胞癌組織中的表達及臨床意義[J]. 陳浩,段曉峰,樸正國,歐陽可雄,Muy-Teck Teh,馬洪.  貴州醫(yī)藥. 2017(09)
[3]BMPR1B基因在細毛羊皮膚毛囊中的表達及與羊毛性狀關系的研究[J]. 王小佳,賀建寧,程明,劉開東,劉積鳳,柳楠.  中國畜牧雜志. 2017(01)
[4]皮膚毛囊發(fā)育的轉錄組研究進展[J]. 江瑋,范一星,喬賢,張燕軍,劉志紅,趙艷紅,王瑞軍,王志新,張文廣,蘇蕊,李金泉.  遺傳. 2015(06)
[5]Hox基因家族對細毛羊羊毛性狀影響的研究[J]. 柳楠,卜然,賀建寧,程明,劉開東,劉積鳳,趙金山.  中國畜牧雜志. 2014(23)
[6]RNA干擾抑制HOXA7表達能逆轉白血病U937細胞多藥耐藥[J]. 尹寶慧,賈秀紅,李建廠.  腫瘤. 2013(07)
[7]哺乳動物毛囊結構特征及調控機制[J]. 馬馨,陳洋,姜懷志.  中國草食動物科學. 2013(01)
[8]內蒙古絨山羊Hoxa7基因在毛囊中的表達[J]. 張燕軍,李金泉,尹俊,高愛琴,張文廣,趙艷紅.  湖北農(nóng)業(yè)科學. 2010(03)
[9]敖漢細毛羊[J]. 宗澤君,孫德欣.  農(nóng)村養(yǎng)殖技術. 2004(20)
[10]敖漢細毛羊品種形成與發(fā)展前景[J]. 劉海山,李恒榮,于洪杰,劉俊茹,張富.  當代畜禽養(yǎng)殖業(yè). 2001(08)

博士論文
[1]影響綿羊毛纖維與毛囊結構及生產(chǎn)性狀的分子機理研究[D]. 李樹偉.吉林大學 2008



本文編號：3151114