豬細(xì)小病毒為細(xì)小病毒科細(xì)小病毒亞科細(xì)小病毒屬成員。豬細(xì)小病毒是單股負(fù)鏈線性DNA病毒,病毒直徑約為20nm左右。豬細(xì)小病毒為無囊膜的二十面體結(jié)構(gòu),其蛋白外鞘由60個(gè)次蛋白衣殼構(gòu)成。豬細(xì)小病毒能夠引起豬的繁殖障礙,主要表現(xiàn)為懷孕母豬引起胎兒木乃伊化、流產(chǎn)、新生仔豬死亡等。豬細(xì)小病毒基因組大小約為5Kb左右,包含有2個(gè)完整的開放閱讀框（ORF）,3’端的ORF編碼非結(jié)構(gòu)蛋白NS,5’端的ORF編碼結(jié)構(gòu)蛋白VP。結(jié)構(gòu)蛋白VP又可細(xì)分為VP1蛋白和VP2蛋白。本研究根據(jù)GenBank中登錄的豬細(xì)小病毒VP2基因序列特征設(shè)計(jì)特異性引物,采用PCR方法對(duì)從福建省某疑似豬細(xì)小病毒感染的死胎中分離的豬細(xì)小病毒福建株中擴(kuò)增其VP2基因,將擴(kuò)增后的目的片段經(jīng)膠回收后克隆測(cè)序。結(jié)果表明,所擴(kuò)增的目的片段編碼有完整的VP2開放閱讀框。VP2基因全長(zhǎng)為1740bp,編碼有579個(gè)氨基酸,蛋白大小為64.287 Kd,強(qiáng)堿性氨基酸（K、R）37個(gè),強(qiáng)酸性氨基酸（D、E）48個(gè),疏水性氨基酸（A、1、L、F、W、V）159個(gè),極性氨基酸（N、C、Q、S、T、Y）213個(gè)。所編碼的VP2蛋白理論等電點(diǎn)為5.81。負(fù)電... 

【文章來源】：福建農(nóng)林大學(xué)福建省

【文章頁(yè)數(shù)】：39 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 豬細(xì)小病毒的病原學(xué)
    2 流行病學(xué)
    3 豬細(xì)小病毒的基因組結(jié)構(gòu)特征
    4 豬細(xì)小病毒的診斷
        4.1 病毒分離
        4.2 血凝試驗(yàn)和血凝抑制試驗(yàn)
        4.3 血清中和試驗(yàn)
        4.4 乳膠凝集試驗(yàn)
        4.5 對(duì)流免疫電泳
        4.6 免疫熒光技術(shù)
        4.7 免疫層析技術(shù)
        4.8 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)
    5 豬細(xì)小病毒疫苗研究
        5.1 亞單位疫苗
        5.2 多價(jià)疫苗
        5.3 核酸免疫疫苗
    6 本研究的目的與意義
第二章 豬細(xì)小病毒結(jié)構(gòu)蛋白VP2的生物信息學(xué)分析
    1 材料與方法
        1.1 主要實(shí)驗(yàn)試劑和分子生物學(xué)材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        1.3 病毒分離
            1.3.1 病料收集與處理
            1.3.2 病料接種
            1.3.3 病毒增殖
            1.3.4 血凝活性檢測(cè)
        1.4 病毒VP2基因的克隆
            1.4.1 病毒核酸的提取
            1.4.2 引物設(shè)計(jì)
            1.4.3 PCR擴(kuò)增
            1.4.4 PCR結(jié)果的的電泳鑒定
            1.4.5 目的基因的膠回收
            1.4.6 膠回收產(chǎn)物的連接與轉(zhuǎn)化
            1.4.7 重組質(zhì)粒的提取
            1.4.8 重組質(zhì)粒的PCR鑒定
            1.4.9 重組質(zhì)粒的酶切鑒定
        1.5 序列測(cè)定與拼接
        1.6 VP2基因的生物信息學(xué)分析
            1.6.1 基本理化性質(zhì)分析
            1.6.2 蛋白疏水性分析
            1.6.3 抗原性分析
            1.6.4 三級(jí)結(jié)構(gòu)模擬
            1.6.5 核苷酸同源性分析
            1.6.6 遺傳進(jìn)化分析
    2 結(jié)果
        2.1 VP2的PCR擴(kuò)增
        2.2 VP2的核苷酸序列和氨基酸序列
        2.3 VP2蛋白的基本理化特征
        2.4 VP2蛋白的疏水性分析
        2.5 VP2蛋白Proteam分析
        2.6 VP2蛋白三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
        2.7 VP2核苷酸同源性分析
        2.8 遺傳進(jìn)化分析
    3 結(jié)果與討論
第三章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3148553