牛諾如病毒（BNoV）是國內(nèi)新發(fā)的犢牛腹瀉病原,筆者擬建立檢測BNoV的Real-time PCR方法。根據(jù)BNoV流行株的RNA聚合酶（RdRp）基因序列設(shè)計(jì)引物,通過優(yōu)化反應(yīng)條件和體系,成功建立基于EvaGreen檢測BNoV的Real-time PCR方法。該檢測方法的Ct值與標(biāo)準(zhǔn)品模板在2.24×10²～2.24×10⁸拷貝·μL^-1線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)R²=0.997,擴(kuò)增效率為98.44%;該方法可特異性檢出BNoV,對其他犢牛腹瀉相關(guān)病原呈陰性;最低檢測限為22.4拷貝·μL^-1;批間和批內(nèi)的變異系數(shù)均小于2%,重復(fù)性好。對2017年9月—2019年5月采自河南省的221份犢牛腹瀉樣本中BNoV的檢出率為11.31%（25/221）,采樣場陽性率為92.86%（13/14）。本試驗(yàn)所建方法靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好,為BNoV的檢測和流行病學(xué)調(diào)查提供了有力手段。 

【文章來源】：畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2020,51(07)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：9 頁

【部分圖文】：

BNoV RdRp基因目的片段的PCR擴(kuò)增

重組質(zhì)粒pMD18T-BNoV-RdRp經(jīng)擴(kuò)增后,擴(kuò)增產(chǎn)物在Tm值為87 ℃處出現(xiàn)單一波峰(圖2),無引物二聚體和非特異性擴(kuò)增峰。圖3 熒光定量PCR方法的標(biāo)準(zhǔn)曲線

熒光定量PCR方法的標(biāo)準(zhǔn)曲線

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3141892