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禽流感病毒M2蛋白相互作用宿主蛋白的篩選及初步的功能學(xué)研究

發(fā)布時間:2021-04-16 11:54
  禽流感病毒(Avian Influenza Virus,AIV)基因組至少編碼15種病毒蛋白,其中離子通道AM2/M2蛋白是一種多功能病毒蛋白,可以促進(jìn)病毒樣顆粒的形成、調(diào)節(jié)高爾基體pH值、誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗體,還可影響細(xì)胞的自噬功能和激活NLRP3炎性小體等。宿主細(xì)胞系統(tǒng)是高度復(fù)雜和精密的網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng),由大量的細(xì)胞成分之間的相互作用而形成,病毒劫持這些宿主細(xì)胞系統(tǒng)成分,可以導(dǎo)致新的細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)重新構(gòu)建來滿足它們的復(fù)制需求。分析AM2蛋白與宿主蛋白之間的相互作用有助于闡明AIV感染過程中AM2蛋白的作用機(jī)制。本文以AM2蛋白為研究對象,通過酵母雙雜交篩選獲得與之相互作用的宿主蛋白,并利用多種蛋白質(zhì)相互作用研究技術(shù)驗(yàn)證二者的相互作用以及對病毒復(fù)制的影響。將不具有毒性與自激活作用的pGBKT7-AM2誘餌質(zhì)粒與人淋巴細(xì)胞cDNA文庫進(jìn)行融合雜交,經(jīng)過多次篩選與酵母回轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證后,確定了兩種宿主蛋白與AM2蛋白在酵母細(xì)胞中存在相互作用。對初步篩選獲得的宿主蛋白基因測序分析后發(fā)現(xiàn),兩個蛋白基因分別編碼細(xì)胞色素C氧化酶亞單位II(COXII)和G蛋白β亞單位2(Gβ2)。異三聚體G蛋白是一類具有G... 

【文章來源】:吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)吉林省

【文章頁數(shù)】:55 頁

【學(xué)位級別】:碩士

【部分圖文】:

禽流感病毒M2蛋白相互作用宿主蛋白的篩選及初步的功能學(xué)研究


2離子通道蛋白在流感病毒生命周期中的功能(LawrenceH.Pinto.etal.2009)

陽性克隆,陰性


圖 1.1 假定陽性克隆檢測Fig.1.1 The detection of assume positive clone1-3,6-8 為假定陽性克;4,5,9,10 為陰性克隆d: The assume positive clone is 1-3 and 6-8; The negative c

獵物,質(zhì)粒,酶切鑒定,陽性克隆


圖 1.2 獵物質(zhì)粒的酶切鑒定2 Identification of prey clones by enzyme 2000 DNA Marker;1~6 假定陽性克隆DL2000 DNA Marker; 1~6 The positive clone n

【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]G蛋白偶聯(lián)受體信號新調(diào)控機(jī)制[J]. 李子健.  中國病理生理雜志. 2015(10)
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[3]G蛋白偶聯(lián)受體與G蛋白相互作用的最新研究進(jìn)展[J]. 姜云璐,龔磊,白波,陳京.  生命科學(xué). 2014(02)
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本文編號:3141378

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