旨在研究鴿毛滴蟲是否分泌外泌體及蟲源外泌體的蛋白組成和功能,為探索外泌體在鴿毛滴蟲寄生過程中的作用奠定基礎。采集鴿毛滴蟲感染個體口腔及咽部病灶處樣本,進行分離培養(yǎng)及純化,使用顯微鏡鑒定蟲體形態(tài),提取DNA并比對其序列,確定培養(yǎng)物是否為鴿毛滴蟲蟲株;通過對培養(yǎng)液上清進行超速離心,透射電子顯微鏡、Western blot技術(shù)和納米顆粒追蹤分析（nanoparticle tracking analysis, NTA）鑒定培養(yǎng)液上清中是否含有蟲源外泌體;最后通過Label-free技術(shù)分析蟲源外泌體的蛋白質(zhì)譜表達。結(jié)果顯示,蟲體具有明顯的毛滴蟲形態(tài)及特征,與鴿毛滴蟲ITS1/5.8S/ITS2基因比對率達98%。從蟲體培養(yǎng)液中提取的囊泡經(jīng)透射電子顯微鏡觀察具有明顯的茶托樣結(jié)構(gòu);NTA結(jié)果顯示,粒徑集中于125.1 nm,峰值粒徑為132.3 nm,占比99.3%;CD63和TSG101等外泌體標記蛋白的條帶明顯,表明提取物為外泌體。質(zhì)譜結(jié)果顯示,烯醇酶、3-磷酸甘油醛-脫氫酶、磷酸甘油酸變位酶和延伸因子為表達量較高的蛋白質(zhì)。GO功能注釋顯示外泌體蛋白富集到細胞內(nèi)和胞漿等細胞組分,發(fā)揮GTP連接... 

【文章來源】：畜牧獸醫(yī)學報. 2020,51(07)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：11 頁

【部分圖文】：

鴿毛滴蟲顯微鏡鑒定

2.1.2 DNA提取及測序經(jīng)PCR擴增ITS1/5.8S/ITS2基因后,瓊脂糖凝膠電泳的結(jié)果見圖2,由圖可見,電泳片段條帶明顯,長度在250～500 bp。經(jīng)測序,片段長度為343 bp,在NCBI數(shù)據(jù)庫中進行BLAST比對,結(jié)果見表1,擴增產(chǎn)物與鴿毛滴蟲ITS1/5.8S/ITS2基因具有98.43%的相似性。

表1 測序產(chǎn)物與ITS1/5.8S/ITS2基因BlAST結(jié)果Table 1 BLAST results of sequencing products and ITS1/5.8 S/ITS2 gene 指標 Index 數(shù)值 Value 匹配分值 Max score 558 總體分值 Total score 558 覆蓋率/% Query cover 97 Expect值 E value 6×10-164 一致性/% Consistency 98.432.3 外泌體蛋白質(zhì)譜分析

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3139616