發(fā)布時間：2021-04-15 01:21

　　牛病毒性腹瀉黏膜�。˙VD）是由牛病毒性腹瀉病病毒（BVDV）感染引起的疾病，它被國際獸疫局（OIE）定為B類傳染病，我國在進(jìn)出口檢疫中把它定位為二類傳染病。其臨床癥狀主要表現(xiàn)為腹瀉，消化道黏膜脫落、糜爛。會導(dǎo)致母畜流產(chǎn)、死胎和畸胎等。尤其是會產(chǎn)生持續(xù)性感染和免疫耐受，在臨床檢測上經(jīng)常出現(xiàn)漏檢和檢不出的情況，這給該病的預(yù)防、診斷、治療帶來障礙。針對上述問題，本論文以研究實用的診斷方法為出發(fā)點，旨在為生產(chǎn)實踐過程中出現(xiàn)的不同情況提供針對性的檢測方法，具體成果如下：1建立SYER Green熒光定量RT-PCR方法本實驗針對BVDV5’端非翻譯區(qū)的保守序列設(shè)計了一對特異性的引物，進(jìn)行普通PCR擴(kuò)增反應(yīng)，目的基因片段長度是181bp。實驗建立并優(yōu)化了SYERGreen熒光定量RT-PCR方法，熔解曲線分析結(jié)果顯示在86.5±0.5℃為單一峰，無引物二聚體和非特異性擴(kuò)增現(xiàn)象。通過熒光定量RT-PCR方法建立了標(biāo)準(zhǔn)曲線，擴(kuò)增效率為95.36%，相關(guān)系數(shù)為0.996，在102～108范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。對47份血清的檢測結(jié)果顯示熒光RT-PCR方法準(zhǔn)確、特異性強，在4小時內(nèi)就可以得到檢測結(jié)果... 

【文章來源】：西南民族大學(xué)四川省

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

正常生長的MDBK細(xì)胞

對建立的 RT-PCR 方法的重復(fù)性進(jìn)行檢測，對 4 個不同樣本進(jìn)行檢測，應(yīng)中，每個樣本做 3 個平行，可以測定變異系數(shù)。樣本檢測樣本處理：將松藩、汶川、紅原采集的牦牛血離心并收集血清，根據(jù)法提取各個樣本中的 RNA，cDNA 合成按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書進(jìn)行好的反應(yīng)體系和反應(yīng)條件對上述樣本 cDNA 分別進(jìn)行熒光定量 PCR 和 檢測。驗結(jié)果正常細(xì)胞的 MDBK 細(xì)胞與 BVDV(OregonC24V 株和 Yak 株)感染細(xì)胞

圖 1-3 對照 MDBK 細(xì)胞 圖 1-4 Yak 感染的 MDBK 細(xì)胞Fig1-3 Control MDBK Fig1-4 MDBK infected by Yak圖 1-1 是正常的 MDBK 細(xì)胞，圖 1-2 是 BVDV OregonC24V 感染 MDBK，當(dāng)感染 24 小時后可見細(xì)胞上有病變產(chǎn)生。圖 1-3 是未接病毒的 MDBK 對胞，圖 1-4 是 BVDVYak 株感染 MDBK 細(xì)胞，培養(yǎng) 3 天后未見細(xì)胞病變。 檢測 BVDV，PCR 后經(jīng) 1%瓊脂糖凝膠電泳：M 1 2 3 4


本文編號：3138385