腦心肌炎病毒（Encephalomyocarditis virus,EMCV）是一種能夠引起大規(guī)模人畜共患傳染病和大量家畜死亡的病原體,被廣泛用于研究抗病毒免疫、病毒性心肌炎和胰島素依賴型糖尿病等的模型。已有研究發(fā)現(xiàn)RLR介導(dǎo)的IFN信號通路在EMCV感染過程中發(fā)揮重要作用,固有免疫通過激活干擾素和促炎細胞因子的產(chǎn)生對病毒感染作出反應(yīng),其中產(chǎn)生的TRIM家族蛋白,對多種病毒的感染具有調(diào)控作用。本研究以具有自身多聚泛素化修飾的E3泛素連接酶作用的TRIM13作為研究對象,分別通過上調(diào)、下調(diào)蛋白表達水平,觀察其對EMCV的作用,并對機制進行了初步探索,得到以下結(jié)果:1、EMCV感染HEK293細胞后,TRIM13的mRNA水平隨病毒感染時間逐漸升高,TRIM13蛋白在病毒感染的36h和48h時與同期未接毒組相比顯著上調(diào),提示TRIM13與EMCV體外感染宿主細胞相關(guān)。2、通過構(gòu)建TRIM13表達上調(diào)和下調(diào)的細胞并進行EMCV感染試驗,結(jié)果證明,TRIM13表達增加可顯著促進EMCV的增殖（P<0.05）;利用靶向TRIM13的RNA干擾序列下調(diào)TRIM13后,顯著抑制EMCV在細胞中... 

【文章來源】：西北民族大學(xué)甘肅省

【文章頁數(shù)】：84 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

EMCV蛋白結(jié)構(gòu)圖

西北民族大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院2020屆碩士研究生學(xué)位論文8圖1-2TRIM蛋白的結(jié)構(gòu)域Fig.1-2Domainstructureoftripartitemotif(TRIM)proteins[62]2.2TRIM家族蛋白的抗病毒特性許多TRIM蛋白在抗病毒天然免疫中扮演重要的作用。多年來，TRIM家族的許多成員被認為是潛在的病毒限制因子[88]。2004年首次發(fā)表TRIM蛋白對病毒感染作用的文章，根據(jù)這項研究，人類免疫缺陷病毒（HIV）可以感染靈長目動物的細胞，但由于存在顯性抑制因子而不能進行逆轉(zhuǎn)錄，該限制因子被鑒定為TRIM5α[89]。大多數(shù)病毒受TRIM家族蛋白影響，屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒[90]。另外，人類11號染色體的短臂上具有該家族基因[67]（圖1-3），大多數(shù)TRIM基因包括TRIM3、TRIM5、TRIM6、TRIM21、TRIM22、TRIM34、TRIM66和TRIM68都定位在染色體短臂上。其中部分基因被鑒定為病毒的限制因子，如TRIM5、22、34是有效的HIV抑制劑[91]。此外，TRIM蛋白可以在不同的階段影響病毒的復(fù)制，包括病毒的侵入、病毒基因組的復(fù)制以及病毒的釋放等過程[92-94]。例如，TRIM5α和TRIM22可以抑制HIV-1的感染[95]；TRIM5和TRIM19(PML)能抑制

西北民族大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院2020屆碩士研究生學(xué)位論文10圖1-3TRIM家族蛋白定位于人11號染色體短臂Fig.1-3Humanchromosome11andthelocalizedTRIMfamilyproteinspresentonshortarm[67]2.3TRIM家族蛋白與免疫調(diào)控泛素化修飾在機體的免疫應(yīng)答過程中發(fā)揮重要的調(diào)控作用，作為泛素化修飾過程中的關(guān)鍵分子，E3泛素連接酶TRIM是天然免疫調(diào)控研究的重點對象，在抗病毒方面扮演重要角色。相反，TRIM27，TRIM30和TRIM38是IFN信號通路的負調(diào)節(jié)劑，它們通過促進其靶蛋白的K48連接多聚泛素化而發(fā)揮作用[117-119]。TRIM8介導(dǎo)細胞信號傳導(dǎo)抑制因子1（SOCS1）的泛素化降解正向調(diào)控IFN-γ相關(guān)信號通路[120]。TRIM21可以介導(dǎo)IKKγ的單泛素化以及自噬性降解進而抑制NF-κB的活化。除此之外TRIM21過表達還抑制日本腦炎病毒（JEV）感染后，人小膠質(zhì)細胞中I型干擾素的表達[121]。TRIM25被證明在K63處泛素化RIG-I，是RIG-I必需的關(guān)鍵修飾物[122]。TRIM31促進了MAVS的K63連接的多泛素化和聚集，從而誘導(dǎo)IFN的表達以抵抗病毒的感染[123]。TRIM44通過去除K48連接的MAVS的多聚泛素化作用來穩(wěn)定MAVS[124]。另外，許多TRIM蛋白的表達在固有免疫中被上調(diào)[125-126]，表明其他的TRIM蛋白也可能在病毒感染激活的免疫反應(yīng)中扮演重要作用。然而TRIM13與EMCV抗病毒反應(yīng)的關(guān)系尚未明確。TRIM家族蛋白除了直接干預(yù)病毒進入和復(fù)制外，許多TRIM家族成員調(diào)控固有免疫應(yīng)答相關(guān)信號通路，進而間接調(diào)控病毒的增殖[127]。如TRIM4、TRIM5、TRIM6、TRIM8、TRIM14、TRIM15、TRIM23、TRIM25和TRIM56可以正調(diào)控IFN信號通路中的抗病毒免疫應(yīng)答[128-136]。TRIM23是RIG-I和toll樣受體的


本文編號：3134190