本項目旨在應用現(xiàn)代營養(yǎng)學、細胞系模型、蛋白免疫印跡、實時熒光定量PCR（RT-PCR）等技術手段,從細胞和分子水平探究Ala-Gln與仔豬小腸上皮細胞自噬之間的內在關系及闡明mTOR/p38MAPK信號通路在仔豬小腸上皮細胞自噬過程中的介導作用。研究結果將為揭示Ala-Gln調控仔豬小腸上皮細胞自噬的作用機制提供理論依據(jù),并為Ala-Gln在仔豬飼料中的科學應用提供理論依據(jù)。試驗一不同濃度Ala-Gln對仔豬小腸上皮細胞IPEC-1自噬的影響試驗采用單因子設計,共設有6個處理,每個處理4個重復。在體外培養(yǎng)的各組IPEC-1細胞中分別添加終濃度為0、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2mM的Ala-Gln。采用MTT法制定IPEC-1細胞濃度標準曲線、生長曲線和檢測細胞活力及待細胞生長到融合度到達80%-90%時收集細胞樣品進行Western blot。結果表明:（1）所有添加Ala-Gln組的細胞生存率均極顯著大于對照組（P<0.01）,其中3.2mM水平添加組細胞生存率高于對照組51.08%（P<0.01）;3.2mM水平添加組的細胞生存率極顯著大于0.2mM、0.4m... 

【文章來源】：江西農業(yè)大學江西省

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮寫詞表（Abbreviations）
第一章 文獻綜述
    1 研究目的和意義
    2 國內外研究現(xiàn)狀
        2.1 細胞自噬
            2.1.1 細胞自噬的概念及其主要生理功能
            2.1.2 細胞自噬的調控
        2.2 谷氨酰胺及谷氨酰胺二肽對細胞自噬的調控作用
        2.3 mTOR信號通路研究進展
            2.3.1 mTOR信號通路與細胞凋亡
            2.3.2 mTOR信號通路與細胞生長和蛋白合成
            2.3.3 mTOR信號通路與細胞自噬
        2.4 p38MAPK信號通路研究進展
    3 研究內容
        3.1 Ala-Gln對仔豬小腸上皮細胞自噬的影響
        3.2 Ala-Gln調節(jié)IPEC-1自噬的mTOR和p38MAPK信號通路研究
        3.3 Ala-Gln對IPEC-1細胞mTOR信號通路下游信號分子及相關基因表達的影響
        3.4 試驗技術路線
第二章 試驗研究
    試驗一 Ala-Gln對仔豬小腸上皮細胞IPEC-1 自噬的影響
        前言
        1 材料與方法
            1.1 材料
                1.1.1 試劑
                1.1.2 儀器與設備
                1.1.3 試驗分組與設計
                1.1.4 試驗細胞
            1.2 試驗方法
                1.2.1 IPEC-1 細胞培養(yǎng)
                1.2.2 MTT試驗中IPEC-1細胞接種數(shù)與OD值的關系確定及生長曲線的制定
                1.2.3 MTT法檢測不同濃度Ala-Gln對IPEC-1細胞活力的影響
                1.2.4 Western blot檢測LC3-Ⅱ、p62的蛋白表達量
            1.3 統(tǒng)計分析
        2 結果與分析
            2.1 IPEC-1細胞接種數(shù)與OD值關系及IPEC-1 細胞生長曲線
            2.2 Ala-Gln對IPEC-1 細胞活力的影響
            2.3 Ala-Gln對IPEC-1 細胞LC3-Ⅱ、p62蛋白表達量的影響
        3 討論
            3.1 MMT試驗中IPEC-1 細胞接種數(shù)與OD值關系及生長曲線
            3.2 Ala-Gln對IPEC-1 細胞活力的影響
            3.3 Ala-Gln對IPEC-1 細胞LC3-Ⅱ、p62蛋白表達量的影響
        4 小結
    試驗二 Ala-Gln調節(jié)IPEC-1 細胞自噬的mTOR和p38MAPK信號通路研究
        前言
        1 材料與方法
            1.1 材料
                1.1.1 主要試劑
                1.1.2 主要儀器與設備
                1.1.3 試驗分組及設計
                1.1.4 試驗細胞
            1.2 試驗方法
                1.2.1 IPEC-1 細胞培養(yǎng)
                1.2.2 特異性抑制劑雷帕霉素和SB203580對IPEC-1細胞活力的影響
                1.2.3 特異性抑制劑對mTOR、p38MAPK信號通路的影響
                1.2.4 Ala-Gln調節(jié)IPEC-1 細胞自噬的mTOR信號通路對細胞自噬的的影響
                1.2.5 Ala-Gln調節(jié)IPEC-1 細胞自噬的p38MAPK信號通路對細胞自噬的影響
            1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計處理
        2 結果與分析
            2.1 雷帕霉素和SB203580信號通路對IPEC-1細胞活力的影響mTOR信號通路對IPEC-1細胞活力的影響見圖2.1
            2.2 Ala-Gln調節(jié)IPEC-1 自噬的mTOR信號通路對自噬的的影響
            2.3 Ala-Gln調節(jié)IPEC-1 自噬的p38MAPK信號通路對自噬的影響
        3 討論
        4 小結
    試驗三 Ala-Gln對IPEC-1 細胞mTOR信號通路下游信號分子及其相關基因表達的影響
        前言
        1 材料與方法
            1.1 材料
                1.1.1 主要試劑
                1.1.2 主要儀器
            1.2 試驗方法
                1.2.1 細胞培養(yǎng)及收集
                1.2.2 Ala-Gln對mTOR信號通路相關蛋白的影響
                1.2.3 細胞總RNA的提取
                1.2.4 引物設計和合成
                1.2.5 cDNA合成操作步驟
                1.2.6 實時熒光定量PCR
            1.3 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計分析
        2 結果與分析
            2.1 Ala-Gln對mTOR信號通路相關蛋白的影響
            2.2 Ala-Gln對mTOR信號通路中相關mRNA表達量的影響
            2.3 Ala-Gln對p53、Bax的mRNA表達量的影響
        3 討論
        4 小結
第三章 本研究總體結論、創(chuàng)新點及有待進一步研究的問題
    1 全文結論
    2 創(chuàng)新點
    3 有待進一步研究的問題
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]硫化氫通過p38MAPK信號通路對肝纖維化大鼠肝細胞增殖、凋亡的影響[J]. 鄭娜娜,岳雅倫,鄭勇,劉浩,張傳峰,陳衛(wèi)剛.  世界華人消化雜志. 2015(06)
[2]雷帕霉素誘導細胞自噬在衰老相關疾病中的作用[J]. 吳伯艷,劉新光,陳維春.  中國藥理學通報. 2015(01)
[3]脂多糖通過p38/MAPK通路對巨噬細胞自噬的調控作用[J]. 杜濤,江先漢,陳慧,賴義明,張睿,黃海.  中山大學學報(醫(yī)學科學版). 2014(06)
[4]雷帕霉素對人角質形成細胞系HaCaT細胞自噬誘導效應及其分子機制的初步研究[J]. 陳旭,徐松,黃丹,鞠梅,陳崑,李新宇,顧恒.  臨床皮膚科雜志. 2014(05)
[5]mTOR信號通路介導黃芩苷抑制人結腸癌細胞的增殖[J]. 吳登艷,宋嬌,董海良,邢偉,徐祥,黃宏,郝進.  第三軍醫(yī)大學學報. 2012(23)
[6]細胞自噬:病理學研究的新熱點[J]. 邱冬梅,陳莉.  臨床與實驗病理學雜志. 2012(03)
[7]Differential regulation of protein synthesis in skeletal muscle and liver of neonatal pigs by leucine through an mTORC1-dependent pathway[J]. Agus Suryawan,Hanh V Nguyen,Rosemarie D Almonaci,Teresa A Davis.  Journal of Animal Science and Biotechnology. 2012(01)
[8]精氨酸和谷氨酰胺對豬小腸上皮細胞增殖的影響及機理探討[J]. 聶新志,蔣宗勇,林映才,鄭春田,周桂蓮,汪仕奎,王麗.  中國農學通報. 2012(02)
[9]MTT法測定大腸桿菌活菌數(shù)實驗研究[J]. 汪志榮,高瓊,馬傳鑫,李燕妮.  環(huán)境科學學報. 2011(12)
[10]雷帕霉素對肺癌細胞mTOR信號通路相關蛋白表達的作用[J]. 曾波航,莊瑩,陳靜琦,江素華,曾木圣.  腫瘤防治研究. 2011(10)

博士論文
[1]細胞自噬與凋亡的平衡調控在亞硒酸鈉治療白血病過程中的作用機制[D]. 姜茜.北京協(xié)和醫(yī)學院 2012
[2]mTOR信號通路在細胞生長調控中的作用與機制研究[D]. 王志鋼.內蒙古大學 2008
[3]冬凌草甲素誘導人腫瘤細胞自噬與凋亡關系的研究[D]. 崔僑.沈陽藥科大學 2007

碩士論文
[1]眼鏡蛇神經(jīng)毒素對人肺腺癌A549細胞生長抑制作用研究[D]. 申健.蘇州大學 2014
[2]雷帕霉素調控足細胞自噬在糖尿病腎病中的作用研究[D]. 肖堂利.第三軍醫(yī)大學 2014
[3]谷氨酰胺對奶牛乳腺上皮細胞生長與增殖及HSP70表達的影響[D]. 史紅霞.南京農業(yè)大學 2009
[4]谷氨酰胺對鯉魚腸上皮細胞生長和代謝的影響[D]. 姜俊.四川農業(yè)大學 2005



本文編號：3131330