本項(xiàng)目旨在應(yīng)用現(xiàn)代營養(yǎng)學(xué)、細(xì)胞系模型、蛋白免疫印跡、實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-PCR）等技術(shù)手段,從細(xì)胞和分子水平探究Ala-Gln與仔豬小腸上皮細(xì)胞自噬之間的內(nèi)在關(guān)系及闡明mTOR/p38MAPK信號(hào)通路在仔豬小腸上皮細(xì)胞自噬過程中的介導(dǎo)作用。研究結(jié)果將為揭示Ala-Gln調(diào)控仔豬小腸上皮細(xì)胞自噬的作用機(jī)制提供理論依據(jù),并為Ala-Gln在仔豬飼料中的科學(xué)應(yīng)用提供理論依據(jù)。試驗(yàn)一不同濃度Ala-Gln對仔豬小腸上皮細(xì)胞IPEC-1自噬的影響試驗(yàn)采用單因子設(shè)計(jì),共設(shè)有6個(gè)處理,每個(gè)處理4個(gè)重復(fù)。在體外培養(yǎng)的各組IPEC-1細(xì)胞中分別添加終濃度為0、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2mM的Ala-Gln。采用MTT法制定IPEC-1細(xì)胞濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線、生長曲線和檢測細(xì)胞活力及待細(xì)胞生長到融合度到達(dá)80%-90%時(shí)收集細(xì)胞樣品進(jìn)行Western blot。結(jié)果表明:（1）所有添加Ala-Gln組的細(xì)胞生存率均極顯著大于對照組（P<0.01）,其中3.2mM水平添加組細(xì)胞生存率高于對照組51.08%（P<0.01）;3.2mM水平添加組的細(xì)胞生存率極顯著大于0.2mM、0.4m... 

【文章來源】：江西農(nóng)業(yè)大學(xué)江西省

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮寫詞表（Abbreviations）
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 研究目的和意義
    2 國內(nèi)外研究現(xiàn)狀
        2.1 細(xì)胞自噬
            2.1.1 細(xì)胞自噬的概念及其主要生理功能
            2.1.2 細(xì)胞自噬的調(diào)控
        2.2 谷氨酰胺及谷氨酰胺二肽對細(xì)胞自噬的調(diào)控作用
        2.3 mTOR信號(hào)通路研究進(jìn)展
            2.3.1 mTOR信號(hào)通路與細(xì)胞凋亡
            2.3.2 mTOR信號(hào)通路與細(xì)胞生長和蛋白合成
            2.3.3 mTOR信號(hào)通路與細(xì)胞自噬
        2.4 p38MAPK信號(hào)通路研究進(jìn)展
    3 研究內(nèi)容
        3.1 Ala-Gln對仔豬小腸上皮細(xì)胞自噬的影響
        3.2 Ala-Gln調(diào)節(jié)IPEC-1自噬的mTOR和p38MAPK信號(hào)通路研究
        3.3 Ala-Gln對IPEC-1細(xì)胞mTOR信號(hào)通路下游信號(hào)分子及相關(guān)基因表達(dá)的影響
        3.4 試驗(yàn)技術(shù)路線
第二章 試驗(yàn)研究
    試驗(yàn)一 Ala-Gln對仔豬小腸上皮細(xì)胞IPEC-1 自噬的影響
        前言
        1 材料與方法
            1.1 材料
                1.1.1 試劑
                1.1.2 儀器與設(shè)備
                1.1.3 試驗(yàn)分組與設(shè)計(jì)
                1.1.4 試驗(yàn)細(xì)胞
            1.2 試驗(yàn)方法
                1.2.1 IPEC-1 細(xì)胞培養(yǎng)
                1.2.2 MTT試驗(yàn)中IPEC-1細(xì)胞接種數(shù)與OD值的關(guān)系確定及生長曲線的制定
                1.2.3 MTT法檢測不同濃度Ala-Gln對IPEC-1細(xì)胞活力的影響
                1.2.4 Western blot檢測LC3-Ⅱ、p62的蛋白表達(dá)量
            1.3 統(tǒng)計(jì)分析
        2 結(jié)果與分析
            2.1 IPEC-1細(xì)胞接種數(shù)與OD值關(guān)系及IPEC-1 細(xì)胞生長曲線
            2.2 Ala-Gln對IPEC-1 細(xì)胞活力的影響
            2.3 Ala-Gln對IPEC-1 細(xì)胞LC3-Ⅱ、p62蛋白表達(dá)量的影響
        3 討論
            3.1 MMT試驗(yàn)中IPEC-1 細(xì)胞接種數(shù)與OD值關(guān)系及生長曲線
            3.2 Ala-Gln對IPEC-1 細(xì)胞活力的影響
            3.3 Ala-Gln對IPEC-1 細(xì)胞LC3-Ⅱ、p62蛋白表達(dá)量的影響
        4 小結(jié)
    試驗(yàn)二 Ala-Gln調(diào)節(jié)IPEC-1 細(xì)胞自噬的mTOR和p38MAPK信號(hào)通路研究
        前言
        1 材料與方法
            1.1 材料
                1.1.1 主要試劑
                1.1.2 主要儀器與設(shè)備
                1.1.3 試驗(yàn)分組及設(shè)計(jì)
                1.1.4 試驗(yàn)細(xì)胞
            1.2 試驗(yàn)方法
                1.2.1 IPEC-1 細(xì)胞培養(yǎng)
                1.2.2 特異性抑制劑雷帕霉素和SB203580對IPEC-1細(xì)胞活力的影響
                1.2.3 特異性抑制劑對mTOR、p38MAPK信號(hào)通路的影響
                1.2.4 Ala-Gln調(diào)節(jié)IPEC-1 細(xì)胞自噬的mTOR信號(hào)通路對細(xì)胞自噬的的影響
                1.2.5 Ala-Gln調(diào)節(jié)IPEC-1 細(xì)胞自噬的p38MAPK信號(hào)通路對細(xì)胞自噬的影響
            1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理
        2 結(jié)果與分析
            2.1 雷帕霉素和SB203580信號(hào)通路對IPEC-1細(xì)胞活力的影響mTOR信號(hào)通路對IPEC-1細(xì)胞活力的影響見圖2.1
            2.2 Ala-Gln調(diào)節(jié)IPEC-1 自噬的mTOR信號(hào)通路對自噬的的影響
            2.3 Ala-Gln調(diào)節(jié)IPEC-1 自噬的p38MAPK信號(hào)通路對自噬的影響
        3 討論
        4 小結(jié)
    試驗(yàn)三 Ala-Gln對IPEC-1 細(xì)胞mTOR信號(hào)通路下游信號(hào)分子及其相關(guān)基因表達(dá)的影響
        前言
        1 材料與方法
            1.1 材料
                1.1.1 主要試劑
                1.1.2 主要儀器
            1.2 試驗(yàn)方法
                1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及收集
                1.2.2 Ala-Gln對mTOR信號(hào)通路相關(guān)蛋白的影響
                1.2.3 細(xì)胞總RNA的提取
                1.2.4 引物設(shè)計(jì)和合成
                1.2.5 cDNA合成操作步驟
                1.2.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
            1.3 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)分析
        2 結(jié)果與分析
            2.1 Ala-Gln對mTOR信號(hào)通路相關(guān)蛋白的影響
            2.2 Ala-Gln對mTOR信號(hào)通路中相關(guān)mRNA表達(dá)量的影響
            2.3 Ala-Gln對p53、Bax的mRNA表達(dá)量的影響
        3 討論
        4 小結(jié)
第三章 本研究總體結(jié)論、創(chuàng)新點(diǎn)及有待進(jìn)一步研究的問題
    1 全文結(jié)論
    2 創(chuàng)新點(diǎn)
    3 有待進(jìn)一步研究的問題
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[4]雷帕霉素對人角質(zhì)形成細(xì)胞系HaCaT細(xì)胞自噬誘導(dǎo)效應(yīng)及其分子機(jī)制的初步研究[J]. 陳旭,徐松,黃丹,鞠梅,陳崑,李新宇,顧恒.  臨床皮膚科雜志. 2014(05)
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博士論文
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[3]冬凌草甲素誘導(dǎo)人腫瘤細(xì)胞自噬與凋亡關(guān)系的研究[D]. 崔僑.沈陽藥科大學(xué) 2007

碩士論文
[1]眼鏡蛇神經(jīng)毒素對人肺腺癌A549細(xì)胞生長抑制作用研究[D]. 申健.蘇州大學(xué) 2014
[2]雷帕霉素調(diào)控足細(xì)胞自噬在糖尿病腎病中的作用研究[D]. 肖堂利.第三軍醫(yī)大學(xué) 2014
[3]谷氨酰胺對奶牛乳腺上皮細(xì)胞生長與增殖及HSP70表達(dá)的影響[D]. 史紅霞.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009
[4]谷氨酰胺對鯉魚腸上皮細(xì)胞生長和代謝的影響[D]. 姜俊.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005



本文編號(hào)：3131330