本研究利用含有HSA和Neo基因的乳腺特異性表達(dá)載體pBC1-HSA轉(zhuǎn)染延邊奶山羊耳成纖維細(xì)胞,經(jīng)G418篩選后獲得轉(zhuǎn)基因細(xì)胞,繼續(xù)培養(yǎng)、傳代后進(jìn)行PCR鑒定,檢驗(yàn)?zāi)康幕蚴欠癯晒φ�。由于不同�?xì)胞的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的最佳條件不同,為獲得最高的轉(zhuǎn)染效率,本試驗(yàn)通過質(zhì)粒DNA的量、脂質(zhì)體的量和細(xì)胞暴露DNA-脂質(zhì)體復(fù)合物的時(shí)間三個(gè)方面來優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件。最后,通過細(xì)胞轉(zhuǎn)基因前后的生長曲線和核型,比較分析轉(zhuǎn)基因?qū)Τ衫w維細(xì)胞的影響。得到試驗(yàn)結(jié)果如下：1、通過組織塊貼壁培養(yǎng)法,成功獲得廷邊奶山羊耳部成纖維細(xì)胞。觀察細(xì)胞形態(tài)及生長速度,對細(xì)胞進(jìn)行生長曲線和核型分析,可知4-13代細(xì)胞生長狀態(tài)良好,可用于轉(zhuǎn)基因試驗(yàn)。2、延邊奶山羊耳成纖維細(xì)胞對G418的最小致死濃度為600μg/ml,篩選時(shí)使用濃度為700μg/ml,維持篩選濃度為350μg/ml。3、適宜代數(shù)的延邊奶山羊耳成纖維細(xì)胞,利用LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染pBC1-HSA,24孔細(xì)胞培養(yǎng)板的最佳轉(zhuǎn)染條件為質(zhì)粒DNA的量為0.8μg、LipofectamineTM2000的量為2.0μl、最佳轉(zhuǎn)染時(shí)間為6h,獲得最高的轉(zhuǎn)染效率為12... 

【文章來源】：延邊大學(xué)吉林省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 動物轉(zhuǎn)基因技術(shù)
    1.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)的研究進(jìn)展
    1.3 HSA的研究進(jìn)展
    1.4 試驗(yàn)?zāi)康募把芯恳饬x
第二章 材料與方法
    2.1 試驗(yàn)材料與儀器
    2.2 試驗(yàn)方法
第三章 結(jié)果與分析
    3.1 延邊奶山羊耳成纖維細(xì)胞原代細(xì)胞與其他代數(shù)細(xì)胞生長狀態(tài)的觀察
    3.2 一次性細(xì)胞培養(yǎng)瓶與重復(fù)利用細(xì)胞培養(yǎng)瓶貼壁率的比較
    3.3 延邊奶山羊耳成纖維細(xì)胞對G418最小致死劑量的測定
    3.4 轉(zhuǎn)染用質(zhì)粒DNA的制備
TM 2000對細(xì)胞存活率的影響">    3.5 Lipofectamine^TM 2000對細(xì)胞存活率的影響
    3.6 延邊奶山羊耳成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)染條件的優(yōu)化
    3.7 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系的PCR檢測
    3.8 細(xì)胞轉(zhuǎn)基因前后生長曲線的繪制
    3.9 細(xì)胞轉(zhuǎn)基因前后的核型分析
第四章 討論
    4.1 廷邊奶山羊耳成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)
    4.2 延邊奶山羊耳成纖維細(xì)胞的轉(zhuǎn)染及鑒定
    4.3 G418篩選及培養(yǎng)中存在的問題
    4.4 轉(zhuǎn)基因前后細(xì)胞生長曲線的比較
    4.5 轉(zhuǎn)基因前后延邊奶山羊耳成纖維細(xì)胞的核型分析
第五章 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄
    論文發(fā)表情況
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本文編號：3128373